Effet de l’extrait FSN17 sur la phase inflammatoire

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PARTIE CHIMIQUE

Préparation de l’extrait

Les feuilles d’une plante appartenant à la famille des FABACEAE ont été récoltées dans la région d’Analamanga au mois de novembre 2016. Elles ont été lavées, découpées en petits morceaux, puis séchées à l’ombre et à la température ambiante pendant quinze jours.
Ensuite, elles ont été broyées à l’aide d’un broyeur à marteau électrique (BROOK CROMPTON® série 2000) au LPGPC (Laboratoire de Pharmacologie Générale, de Pharmacocinétique et de Cosmétologie, à la faculté des Sciences, Université d’Antananarivo). Deux cent grammes de la poudre obtenue ont été macérés dans un mélange éthanol-eau (60 : 40), à la température ambiante pendant trois jours. Le macérât obtenu a été filtré sur du coton hydrophile et le filtrat a été évaporé à l’aide d’un distillateur à réfrigérant à la température de 80 °C, ensuite au bain marie à la température de 100 °C (Figure 1). L’extrait hydro alcoolique obtenu a été récupéré et codé FSN17, puis pesé pour calculer le rendement de l’extraction selon la formule:

Criblage phytochimique

Un criblage phytochimique a été effectué sur l’extrait FSN17 pour déterminer les familles chimiques qu’il contient (DOHOU N., et coll., 2003). Ce test est basé sur l’utilisation de réactifs spécifiques qui réagissent avec une famille chimique en formant un précipité ou en provoquant un changement de couleur de l’extrait (Tableau I) (FONG H. H. S. et coll., 1977). Les signes suivants ont été utilisés pour indiquer la teneur des familles chimiques présentes dans l’extrait FSN17:
➢ (±): présence en très faible teneur
➢ (+): présence en faible teneur
➢ (++): présence en teneur moyenne
➢ (+++): présence en forte teneur

PARTIE PHARMACOLOGIQUE

Pour étudier l’activité de FSN17, l’extrait FSN17 a été appliqué sous forme de crème contenant 10 % de l’extrait sur une plaie expérimentale ouverte chez le rat. L’effet de l’extrait sur les différentes étapes de la cicatrisation a été étudié en observant les plaies tous les jours et en calculant la vitesse de cicatrisation.

Préparation de la crème

La crème de base utilisée est une émulsion eau dans huile constituée de deux phases: une phase aqueuse et une phase grasse (Tableau II). La phase grasse a été constituée d’huile d’olive, de cire d’abeille, d’alcool stéaryle et d’acide stéarique. Tandis que la phase aqueuse a été constituée de l’eau distillée et du bicarbonate. La cire d’abeille a été râpée puis placée dans un récipient en inox. Cette cire a été fondue dans un bain marie maintenu à la température de 80 °C. Lorsqu’elle est fondue, l’huile de tournesol, l’alcool stéaryle et l’acide stéarique ont été rajoutés dans le récipient. Dans un autre récipient en inox, le bicarbonate a été dissout dans l’eau distillée, puis cette solution a été chauffé au bain marie à la température de 80 °C. Ensuite, la phase aqueuse a été versée petit à petit dans la phase grasse maintenue à la température de 80 °C, en fouettant à l’aide d’une batteuse électrique, jusqu’à l’obtention d’une crème homogène (RAKOTONIRINA M. F. S., 2010). La crème contenant 10 % de FSN17 utilisée dans les tests biologiques a été préparée en incorporant 14,5 g de l’extrait FSN17 dans 131,5 g de la crème de base.

Animaux d’expérimentation

Des rats de souche Wistar, des deux sexes, âgés de 3 mois, et pesant entre 140 et 200 g ont été utilisés pour les expériences. Ces animaux ont été élevés à l’animalerie du LPGPC où la température moyenne varie entre 20 – 25 °C, avec un cycle de 12 heures de lumière et de 12 heures d’obscurité. Ils ont été nourris avec la provende granulée CPO AGRIVAL avec un accès libre à de l’eau (TCHIN D., 2014).

Création des plaies expérimentales

Une surface de 8 cm2 au niveau de la région dorsale de chaque rat a été rasée puis épilée à l’aide d’une cire épilatoire tiède et des bandelettes. La zone épilée a ensuite été nettoyée avec un coton imbibé d’eau savonneuse. Vingt-quatre heures après l’épilation, les animaux ont été anesthésiés par inhalation d’éther éthylique (EPA C., et coll., 2015), puis deux plaies circulaires ont été créées sur la partie dorsale épilée de part et d’autre de la colonne vertébrale à l’aide d’un dispositif tranchant à base circulaire de 10 mm de diamètre (OFORI‐KWAKYE K. et coll., 2011).
Ces animaux ont été ensuite répartis en 2 lots: 1 lot témoin qui a reçu 10 mg de crème de base et 1 lot traité avec 10 mg de crème contenant 10 % de l’extrait FSN17.

Application des crèmes

Tous les jours à la même heure, les plaies ont été observées, puis nettoyées. Un coton imbibé d’eau a été placée sur la plaie pour ramollir la croûte, ensuite cette dernière a été enlevée. Dix milligrammes de crème ont été appliquées par voie topique sur chaque plaie une fois par jour jusqu’à la fermeture totale de la plaie.

Etude de l’effet cicatrisant de l’extrait FSN17

Pour étudier l’activité de l’extrait FSN17 sur les plaies expérimentales, la vitesse de cicatrisation de la plaie a été calculée, le début et la durée des différentes phases de la cicatrisation ont été notés.

Etude de l’effet de FSN17 sur l’hémostase

Juste après la création des plaies, la crème de base a été appliquée sur la plaie des animaux témoins, tandis que la crème contenant 10 % de l’extrait FSN17 a été appliquée sur les plaies des animaux du 2ème lot. La durée de saignement a été chronométrée juste après l’application de ces crèmes sur les plaies.

Etude de l’effet de FSN17 sur la phase inflammatoire

L’effet de l’extrait sur la phase inflammatoire a été étudié en observant la rougeur et l’œdème des berges des plaies ainsi que l’existence d’un exsudat au niveau de la surface des plaies ont été notés quotidiennement durant le traitement. Le temps d’apparition et la durée de ces signes ont été enregistrés.

Etude de l’effet de l’extrait FSN17 sur la phase de granulation

Pour étudier l’effet de l’extrait sur la phase de granulation, le temps d’apparition de ces granulations au niveau de la surface des plaies, ainsi que leur nombre ont été notés.

Etude de l’effet de l’extrait FSN17 sur la phase d’épithélialisation

L’épithélialisation est caractérisée par l’apparition de la membrane épithéliale au niveau de la surface des plaies. L’effet de l’extrait sur cette phase a été étudié en observant les plaies tous les jours et en notant le temps d’apparition de cet épithélium au niveau de la surface des plaies.

Etude de l’effet de l’extrait FSN17 sur la vitesse de cicatrisation

La vitesse de cicatrisation a été calculée en rapportant la surface des plaies par rapport au temps. Cette surface a été mesurée tous les trois jours par planimétrie directe : un papier millimétré transparent a été placé sur la plaie puis le contour de la plaie a été tracé sur le papier à l’aide d’un crayon à pointe fine (BENSEGUENI A. et coll., 2007).

Effet de l’extrait FSN17 sur la phase inflammatoire

L’application quotidienne de l’extrait FSN17 sous forme de crème 10 % par voie topique sur les plaies ouvertes diminue la durée de la phase inflammatoire. Vingt-quatre heures après leur création (J1), la berge des plaies traitées avec la crème contenant 10 % de l’extrait FSN17 est rouge et tuméfiée, celle des plaies traitées avec la crème de base est également rouge et tuméfiée. Par contre la surface des plaies traitées avec l’extrait est sèche, tandis que celle des témoins est recouverte par un exsudat (figure 3). Ces signes d’inflammation disparaissent au troisième jour du traitement (J2) chez les plaies traitées avec l’extrait tandis qu’elles persistent jusqu’au sixième jour de traitement (J5) chez les plaies témoins (Figure 4).

Effet de l’extrait FSN17 sur la phase de granulation

L’extrait FSN17 sous forme de crème 10 % accélère l’apparition des tissus de granulation. Après trois jours de traitement, la surface des plaies traitée avec l’extrait FSN17 est comblée de granulations tandis que les plaies traitées avec la crème de base sont encore rouges et n’en présentent qu’au sixième jour de traitement (figure 5). Ce nombre est supérieur à celui des plaies témoins. Chez le lot traité avec l’extrait FSN17, il est de 29 ± 0,31 au 3ème jour du traitement contre 28 ± 1,82 celui des plaies témoins au septième jour du traitement. Le nombre maximale est atteint au cinquième jour du traitement avec une valeur de 44,66 ± 0,54 chez les plaies traitées avec la crème à préparation 10 %, contre 31 ± 0,61 chez les plaies témoins (P < 0,05).

Effet de l’extrait FSN17 sur la phase d’épithélialisation

L’extrait FSN17 sous forme de crème 10 % par voie topique accélère la phase d’épithélialisation des plaies traitées chez le rat. Après huitième jour (J7) du traitement, les plaies traitées avec l’extrait FSN17 sont recouvertes d’un épithélium fin et rose tandis que les plaies traitées avec la crème de base sont en cours d’apparition des tissus de granulation. Les plaies traitées avec l’extrait commencent à se contracter et rapprocher la berge de la plaie (figure 6).
L’application quotidienne de l’extrait FSN17 sur les plaies traitées accélère leur fermeture totale par rapport à la crème de base. Au quinzième jour de traitement (J14) (figure 7), les plaies traitées avec l’extrait FSN17 sont complètement fermées contre celles traitées avec la crème de base ne se ferment qu’au vingt-unième jour de traitement (J20).

Table des matières

LISTE DES FIGURES
LISTE DES ABRÉVIATIONS
INTRODUCTION
MATÉRIELS ET MÉTHODES
A. PARTIE CHIMIQUE
1. Préparation de l’extrait
2. Criblage phytochimique
B. PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1. Préparation de la crème
2. Animaux d’expérimentation
3. Création des plaies expérimentales
4. Application des crèmes
5. Etude de l’effet cicatrisant de l’extrait FSN17
C. EXPRESSION ET ANALYSES DES RÉSULTATS
RÉSULTATS
A. PARTI E CHIMIQUE
1. Rendement de l’extraction
2. Résultats du criblage phytochimique
B. PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1. Effet de l’extrait FSN17 sur l’hémostase
2. Effet de l’extrait FSN17 sur la phase inflammatoire
3. Effet de l’extrait FSN17 sur la phase de granulation
4. Effet de l’extrait FSN17 sur la phase d’épithélialisation
5. Effet de l’extrait FSN17 sur la vitesse de cicatrisation
DISCUSSION
CONCLUSION
BIBLIOGRAPHIE

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