Effet de l’extrait DNK sur les différentes phases de la cicatrisation

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PARTIE PHARMACOLOGIQUE

Un cicatrisant peut être appliqué sur la plaie sous forme de pommade, de crème, ou de cataplasme (FROMANTIN I. et coll., 2011). Dans le présent travail, l’extrait a été appliqué sur des plaies expérimentales chez le rat sous forme de crème contenant 10 % de l’extrait DNK. Des rats de race WISTAR, pesant entre 100 et 160 g ont été utilisés. Ils ont été élevés dans l’animalerie du Laboratoire de Pharmacologie Générale, de Pharmacocinétique et de Cosmétologie, à la Faculté des Sciences, Université d’Antananarivo, à la température 20°C et soumis à une alternance de lumière et d’obscurité de 12 h / 12 h. Ils ont été nourris avec de la provende granulée LFL 14 / 20 et ils ont eu un accès libre à l’eau et à la nourriture.

Préparation de la crème de base

La crème de base utilisée est une émulsion eau dans huile : une phase aqueuse dispersée et une phase grasse dispersante. La phase aqueuse a été constituée de l’eau distillée et du bicarbonate de sodium tandis que la phase grasse a été constituée d’huile de tournesol, de la cire d’abeille, du stéaryle alcool et de l’acide stéarique. Les ingrédients et leur proportion pour préparer 70 g de crème sont présentés dans le tableau II.
Pour préparer la crème de base, la cire d’abeille a été découpée en petits morceaux puis mélangée avec l’huile de tournesol, l’acide stéarique et le stéaryle alcool. Le mélange a été placé dans un récipient en inox, puis chauffé dans un bain marie à la température de 80°C. Dans un autre récipient, l’eau et le bicarbonate de sodium ont été chauffés au bain marie à la même température. Ensuite, la phase aqueuse a été versée petit à petit dans le récipient contenant la phase grasse dans un bain marie à 80°C en fouettant sans arrêt jusqu’à l’obtention d’une crème stable et homogène (DAILLY L. I. et coll., 2007).

Préparation de la crème 10 % d’extrait DNK.

L’activité cicatrisante de l’extrait DNK a été étudiée en l’appliquant une fois par jour sur les plaies expérimentales sous forme de crème à 10 % chez le rat. Pour préparer 100 g de crème à 10 %, 10 g de l’extrait DNK ont été incorporés dans 90 g de crème de base.

Création des plaies expérimentales

Une surface de 80 mm2 au niveau de la région scapulaire du rat, de part et d’autre de la colonne vertébrale, a été rasée puis épilée à l’aide d’une cire épilatoire tiède à l’aide des bandelettes. Cette zone épilée a été ensuite nettoyée avec un coton imbibé d’eau. Vingt-quatre heures après, les animaux ont été anesthésiés par inhalation d’éther diéthylique, puis deux plaies circulaires ont été créées sur la région épilée à l’aide d’un dispositif tranchant circulaire de 1 cm de diamètre (MANJUNATHA B. K. et coll., 2005). Ces animaux ont été ensuite répartis en 2 lots : 1 lot témoin qui a reçu 5 g de crème de base et 1 lot qui a reçu 5 g de crème contenant 10 % de l’extrait DNK. Tous les jours à la même heure, les plaies ont été nettoyées. Elles ont été humidifiées à l’aide d’un coton imbibé d’eau pendant 2 à 3 minutes pour ramollir la croûte, ensuite cette dernière a été enlevée, puis la plaie a été séchée à l’aide d’un papier buvard. Enfin 5 g de crème ont été appliqués sur les plaies.

Etude de l’activité cicatrisante de l’extrait DNK

Pour étudier l’effet cicatrisant de l’extrait DNK, ses effets sur l’hémostase, la phase inflammatoire, la phase de granulation et la phase d’épidermisation ont été observés tous les jours à la même heure, puis la vitesse de contraction des plaies a été calculée (SANTHANAMNG et NAGARAJAN S. 1990). Les plaies ont été photographiées tous les jours.

Etude de l’effet de l’extrait DNK sur l’hémostase

Juste après la provocation des plaies, la crème de base a été appliquée sur la plaie des animaux témoins, tandis que la crème contenant 10 % de l’extrait DNK a été appliquée sur les plaies des animaux du 2ème lot. La durée de saignement a été chronométrée juste après l’application de ces crèmes sur les plaies.

Étude de l’effet de l’extrait DNK sur la phase inflammatoire

L’effet de l’extrait sur la phase inflammatoire a été étudié en observant l’œdème et la rougeur au niveau de la berge des plaies traitées avec la crème contenant l’extrait tous les jours à même heure. La durée de cette phase a été notée chez les plaies traitées avec l’extrait et comparée avec celle des animaux témoins.

Étude de l’effet de l’extrait DNK sur la phase de granulation et d’épidermisation

L’évolution des plaies a été suivie tous les jours, et le temps d’apparition des tissus de granulation au niveau de la surface des plaies a été noté. Pour étudier son effet sur la phase d’épidérmisation, la reconstitution de l’épiderme a été observée.

Étude de l’effet de l’extrait DNK sur la vitesse de contraction des plaies

Pour calculer la vitesse de la cicatrisation, la surface de la plaie a été mesurée par la méthode de planimétrie directe tous les jours à la même heure. Les plaies ont été nettoyées et séchées à l’aide d’un papier buvard avant de mesurer sa surface. Un papier millimétré transparent a été placé sur la plaie et le contour de cette plaie a été tracé sur le papier à l’aide d’un crayon à pointe fine (BENSEGUENI A. et coll., 2007).
Après la mesure de la surface, 5 mg de la crème de base ont été appliqués sur chaque plaie des animaux du lot témoin et 5 mg de crème contenant 10 % de l’extrait chez le 2 éme lot.
La vitesse de cicatrisation a été calculée selon la formule :
Avec,
V : vitesse de cicatrisation
S (n-1) : surface de la plaie avant nième jour
Sn : surface de la plaie à chaque mesure
Jn – J (n-1) : variation du temps entre chaque mesure
La surface de la plaie a été exprimée en mm2

EXPRESSION ET ANALYSES DES RÉSULTATS

Les résultats obtenus ont été exprimés sous forme de moyenne ± écart-type réduit ( ̅ ± e.s.m). Le test « t » du student a été utilisé pour comparer les moyennes avec un degré de signification p < 0, 05.

Table des matières

I. INTRODUCTION
II. MATERIELS ET METHODES
A. PARTIE CHIMIQUE
1. Préparation de l’extrait
2. Criblage phytochimique
B. PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1. Préparation de la crème de base
2. Préparation de la crème 10 % d’extrait DNK.
3. Création des plaies expérimentales
4. Etude de l’activité cicatrisante de l’ extrait DNK
Etude de l’effet de l’extrait DNK sur l’hémostase
Étude de l’effet de l’extrait DNK sur la phase inflammatoire
Étude de l’effet de l’extrait DNK sur la phase de granulation et épidérmisation
5. Étude de l’effet de l’extrait DNK sur la vitesse de contraction des plaies.
C. EXPRESSION ET ANALYSES DES RÉSULTATS
RESULTATS
A. PARTIE CHIMIQUE
1. Rendement d’extraction
2. Résultats du criblage phytochimique
B. PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1. Observation macroscopique des plaies à J0 et J13
2. Effet de l’extrait DNK sur les différentes phases de la cicatrisation
Effet hémostatique de l’extrait
Effet de l’extrait DNK sur la phase inflammatoire
Effet de l’extrait DNK sur la phase de prolifération
3. Effet de l’extrait DNK sur la contraction de la plaie
4. Vitesse de la cicatrisation
DISCUSSION
CONCLUSION
BIBLIOGRAPHIE ET WEBOGRAPHIE

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