Effet de l’application de la crème PAS-F1 à 10% sur la conductance électrique de la peau

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Animaux d’expériences :

Afin d’évaluer le pouvoir hydratant de l’extrait PAS-F1, des souris femelles ; âgées de 5 mois et pesant entre 30 et 40 grammes élevées au sein de l’animalerie du laboratoire de Pharmacologie générale et pharmacocinétique, ont été utilisées (TREU H., 1985; DALAZEN P. et coll., 2005; LAMIA A. et coll., 2005; LERCHE C.M. et coll.2010). Elles ont été réparties au hasard en 4 lots de 5 souris : un lot témoin non traité; un lot témoin neutre traité avec l’excipient ; un lot traité avec la crème contenant 10% de PAS ŔF1 et un lot de référence traité avec de la crème contenant 1% de madécassoside (RAKOTONDRAINIBE V., 2002 ; IMPAG, 2010).
Durant toute l’expérience, les animaux ont été placés dans des cages individuelles et ont été nourris avec de la provende LFL 1420 et ont eu de l’eau à volonté.
L’étude de la tolérance est l’une des démarches à suivre pour le développement d’un produit cosmétique afin de s’assurer qu’il est bien toléré par l’organisme. Pour évaluer la tolérance de la préparation :
– à l’irritation cutanée, des lapins de race albinos, des deux sexes pesant en moyenne 1,8Kg ont été utilisés. Ils ont été acclimatés dans des cages individuelles à une température ambiante de 20 ± 1°C avec un cycle lumière/obscurité 12h/12h durant les 4jours d’expérimentations (OECD, 2002).
– à l’irritation oculaire, des lapins de race albinos, des deux sexes pesant en moyenne 1,8Kg ont été utilisés. Ils ont été acclimatés dans des cages individuelles à une température ambiante de 20 ± 1°C avec un cycle lumière/obscurité 12h/12h pendant les 5 jours avant l’expérimentation et pendant les 7 jours d’observations (GEORGE E.M., 1999 ; OECD, 2002).

Administration du produit :

La partie dorsale de chaque souris a été rasée 24 h avant la première application de la crème pour faciliter le contact du produit avec la peau. Avant chaque application, la peau a été nettoyée avec du coton hydrophile imbibé d’eau, et séchée avec du coton pour éliminer toutes impuretés pouvant influencer la pénétration du produit au niveau de la peau (PEYREFITTE G. et MARTINI M.C., 2008). La crème contenant du PAS-F1 à 10% a été ensuite appliquée à raison de 0,5grammes sur la surface rasée (RAKOTONDRAINIBE V., 2002). Les applications des crèmes par massage circulaire ont été faites 2 fois par jour pendant 28 jours. La première application a été faite le matin et la deuxième application a été faite 9 heures après (TERESA M.W. et coll., 2010 ; TSANG M. et GUY R.H., 2010).
Tous les deux jours, les poils au niveau de la zone traitée ont été coupés au ras en tâchant de ne pas scarifier la peau afin de permettre une meilleure pénétration du produit (RAKOTONDRAINIBE V., 2002).

Mesure des différents paramètres :

Pour mettre en évidence l’activité hydratante de l’extrait PAS-F1, les paramètres suivants ont été étudiés : la conductance électrique, l’épaisseur et la teneur en eau de la peau.

Détermination de la conductance électrique de la peau :

Principe de mesure

Selon CARLI P. et coll. (2004), la peau conduit le courant électrique et une peau hydratée présente moins de résistance au passage du courant qu’une peau déshydratée. Le niveau d’hydratation de la couche cornée a été estimé sur les variations de la résistance électrique de la peau au passage du courant électrique. La résistance électrique de la peau a été mesurée avec une technique non invasive, utilisant un dispositif composé d’un Multimètre (DT92065A), d’un générateur, et d’une sonde composé de 4 électrodes (SCOTT T., 2009; KAPOOR S. et SARAF S., 2010) (fig 2).
Les 4 électrodes lamellaires de 4mm de diamètre et de 0,5mm d’épaisseur sont en or de 24 carats (PARHAS C.et coll., 1979). Afin d’éviter le passage du courant lors des mesures, les 4 électrodes ont été isolés par une couche de silicone.
Pour mesurer la résistance électrique, un courant continu de 1,5V a été appliqué au niveau de la peau à l’aide des deux électrodes A et B et la résistance électrique a été mesurée avec les deux électrodes M et N reliées au multimètre selon U= R x I. Les mesures de la résistance ont été faites dans une pièce à température et humidité ambiante.

Calibrage de l’ohmmètre :

Avant chaque mesure de la résistance électrique de la peau pour chaque animal, l’ohmmètre a été calibré.
La souris a été placée sur un support fixe. Puis, elle a été maintenue immobile par sa queue et les électrodes de la sonde ont été apposées directement sur la peau de la partie dorsale rasée de l’animal. Le calibre minimal de 200 kΩ a été utilisé en premier, si aucune valeur ne s’affiche sur le cadran du multimètre, le calibre a été ajusté à un niveau supérieur jusqu’à ce qu’une valeur de la résistance plus ou moins fixe s’affiche sur le cadran du multimètre. Une fois le calibrage de l’appareil terminé, les premières mesures de la résistance électrique de la peau ont été effectuées.

Détermination de la conductance électrique de la peau 24 h après l’application unique de la crème PAS-F1

La partie dorsale des souris, a été rasée 24 h avant le début de l’expérience. Vingt-quatre heures après rasage (t0), la résistance électrique initiale de la peau a été mesurée et la conductance initiale a été ensuite calculée (KAPOOR S. et SARAF S., 2010).
Les souris ont été réparties en 4 lots dont un lot témoin, un lot témoin traité avec l’excipient, un lot traité avec l’extrait et un lot traité avec le produit de référence. Les souris ayant une même résistance électrique initiale ont été groupées dans un même lot.
Après cette première mesure, aucun produit n’a été appliqué sur la peau des animaux témoins. Pour le lot traité avec excipient, le lot traité avec l’extrait et le lot traité avec le produit de référence, 0,5g de crème a été appliquée par massage circulaire sur la surface rasée. Pour le lot traité avec l’excipient, la crème de base a été appliquée sur la peau. En ce qui concerne le lot traité avec l’extrait, les animaux ont reçu de la crème renfermant 10% de PAS-F1 et ceux traités avec le produit de référence ont reçu de la crème madécassoside à 1%.
Au temps 6 h et 24 h après application du produit, la résistance électrique de la peau a été mesurée afin de déterminer les conductances électriques correspondantes. Le pourcentage d’augmentation de la conductance après application de la crème au temps « t » a été calculé par rapport à la conductance initiale au temps t0.

Détermination de la conductance électrique de la peau après application biquotidienne de la crème PAS-F1 durant 28 jours

La partie dorsale des souris a été rasée 24 h avant la première application des produits. Vingt-quatre heures après rasage (J0), la peau a été nettoyée avec du coton hydrophile imbibé d’eau distillée puis essuyée avec du coton et la résistance électrique initiale de la peau a été mesurée (KAPOOR S. et SARAF S., 2010).
Les souris ont été réparties en 4 lots dont un lot témoin, un lot traité avec l’excipient, un lot traité avec l’extrait et un lot traité avec le produit de référence. Les souris ayant une même résistance électrique initiale ont été groupées dans un même lot.
Après cette première mesure, aucun produit n’a été appliqué sur la peau des animaux témoins. Pour le lot traité avec l’excipient, le lot traité avec l’extrait et le lot traité avec le produit de référence, 0,5g de crème a été appliquée par massage circulaire sur la surface rasée. Pour le lot traité avec l’excipient, la crème de base a été appliquée sur la peau des animaux. En ce qui concerne le lot traité avec l’extrait, les animaux ont reçu de la crème renfermant 10% de PAS-F1 et ceux traités avec le produit de référence ont reçu de la crème madécassoside à 1%.Les applications des crèmes ont été faites 2 fois par jour. La première application a été faite dans la matinée et la deuxième application a été faite 9 heures après. Le traitement a duré 28 jours et les poils au niveau de la zone traitée ont été coupés au ras tous les deux jours afin de permettre une meilleure pénétration du produit.
Les mesures de la résistance électrique de la peau ont été effectuées au 14ème et au 28ème jour de traitement afin de déterminer les conductances électriques correspondantes (AKHTAR N. et coll., 2011). Le pourcentage d’augmentation de la conductance après application de la crème au temps « t » a été calculé par rapport à la conductance initiale au temps t0.

Mesure de l’épaisseur de la peau :

L’épaisseur de la peau varie selon plusieurs paramètres dont le degré d’hydratation de la peau.
La mesure de l’épaisseur permet une détermination indirecte du degré d’hydratation de la peau. Pour cela, les souris ont été réparties en 4 lots dont un lot témoin, un lot traité avec l’excipient, un lot traité avec l’extrait et un lot traité avec le produit de référence.
La partie dorsale des souris a été rasée 24 h avant la première application des produits. Vingt-quatre heures après rasage (J0), aucun produit n’a été appliqué sur la peau des animaux témoins. Pour le lot traité avec l’excipient, le lot traité avec l’extrait et le lot traité avec le produit de référence, 0,5g de crème a été appliquée par massage circulaire sur la surface rasée. Pour le lot traité avec l’excipient, la crème de base a été appliquée sur la peau des animaux. En ce qui concerne le lot traité avec l’extrait, les animaux ont reçu de la crème renfermant 10% de PAS-F1 et ceux traités avec le produit de référence ont reçu de la crème madécassoside à 1%. Les applications des crèmes ont été faites 2 fois par jour. La première application a été faite dans la matinée et la deuxième application a été faite 9 heures après. Le traitement a duré 28 jours et les poils au niveau de la zone traitée ont été coupés au ras tous les deux jours afin de permettre une meilleure pénétration du produit.
A la fin du traitement, les souris ont été anesthésiées avec de l’éther diéthylique puis elles ont été euthanasiées (RANA P.S. et coll., 2005).
Un morceau de peau de la zone traitée a été prélevé puis a été ensuite étalé entre deux lames de verre. L’épaisseur de l’ensemble peau et lames a été mesurée à l’aide d’un pied à coulisse au 1/100ème de précision (VOGEL G.H., 2008)
Puis l’épaisseur de la peau a été calculée: Epaisseur peau = Epaisseur ensemble (peau + lames) Ŕ Epaisseur des lames.
Une augmentation de l’épaisseur de la peau des souris traitées avec l’extrait, par rapport à l’épaisseur de la peau des animaux du lot témoin, traduit une activité hydratante de l’extrait PAS-F1.

Mesure de la teneur en eau :

Chez l’homme, la peau renferme 70% d’eau (ESTRADE M.N., 2006). Pour quantifier cette teneur en eau de la peau, la méthode de SACHDEVA M.K. et TARUNA K., 2011 a été utilisée. Elle consiste à déshydrater totalement la peau.
Pour cela, les souris ont été réparties en 4 lots dont un lot témoin, un lot traité avec l’excipient, un lot traité avec l’extrait et un lot traité avec le produit de référence.
La partie dorsale des souris a été rasée 24 h avant la première application des produits. Vingt-quatre heures après rasage (J0), aucun produit n’a été appliqué sur la peau des animaux témoins. Pour le lot traité avec l’excipient, le lot traité avec l’extrait et le lot traité avec le produit de référence, 0,5g de crème a été appliquée par massage circulaire sur la surface rasée. Pour le lot traité avec l’excipient, la crème de base a été appliquée sur la peau. En ce qui concerne le lot traité avec l’extrait, les animaux ont reçu de la crème renfermant 10% de PAS-F1 et ceux traités avec le produit de référence ont reçu de la crème madécassoside à 1%. Les applications des crèmes ont été faites 2 fois par jour. La première application a été faite dans la matinée et la deuxième application a été faite 9 heures après. Le traitement a duré 28 jours et les poils au niveau de la zone traitée ont été coupés au ras tous les deux jours afin de permettre une meilleure pénétration du produit.
Au bout de 28 jours de traitement, les animaux ont été anesthésiés avec de l’éther diéthylique puis sacrifiés par dislocation cervicale (RANA P.S. et coll., 2005). Et un morceau de peau de 4cm² a été prélevé au niveau de la zone traitée.
Chaque prélèvement a été déposé et pesé dans un cristallisoir dont le poids est connu. Puis, l’ensemble lambeau de peau- cristallisoir a été mis dans une étuve chauffée à 80°C pendant 2 heures. Puis, l’ensemble a été pesée toutes les 10 minutes jusqu’à l’obtention d’un poids constant (GUILBOT, 1964 ; SACHDEVA M.K. et TARUNA K., 2011).
La teneur en eau de la peau (H%) de chaque souris, a été calculée à partir de la formule ci-dessous : H(%)=0.
H (%) : teneur en eau
m0 : Poids du cristallisoir vide (g)
m1 : Poids de l’ensemble : cristallisoir et l’échantillon après séchage (g)
M : Poids de l’ensemble : cristallisoir et l’échantillon avant séchage (g)
Par rapport à la teneur en eau des souris témoin, une teneur en eau élevée au niveau de la peau des souris traitées avec l’extrait PAS-F1 traduit une hydratation de la peau.
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BIOLOGIE :

Effet de l’application de la crème PAS-F1 à 10% sur la conductance électrique de la peau :

Pourcentage de variation de la conductance électrique de la peau 24h après l’application unique de la crème PAS-F1

Chez les animaux du lot témoin, la conductance électrique de la peau reste constante pendant les 24 h d’observations. Par rapport au T0, elle augmente de 0,32 ± 0,94 % après 24 h d’observation (N.S.).
Suite à l’application unique de l’excipient, la conductance électrique de la peau n’a pas changé 24 h après l’application. Par rapport à T0, la conductance électrique diminue de 0,53 ± 2,84 % après la fin du traitement (N.S.).
Par contre, l’application unique de la crème contenant 10% de PAS-F1 modifie la conductance électrique 6 h après. Par rapport à la conductance électrique de la peau au T0, l’application de la crème provoque une augmentation de la conductance électrique de la peau de 15,4 ± 4,33 % (p<0,05).
Et chez les animaux traités avec le produit de référence, l’application unique de la crème contenant 1% de Madécassoside, ne modifie pas la conductance électrique de la peau durant les 24h d’observations. Vingt-quatre heures après application, elle augmente de 6,37 ± 3,47% (Fig 4).
En comparant les résultats obtenus par rapport au lot témoin, l’application de la crème de base, ne modifie pas la conductance électrique de la peau des animaux 24 h après traitement. Chez le lot témoin la conductance électrique de la peau augmente de 0,32 ± 0,94% tandis que chez le lot traité avec l’excipient une baisse de 0,53 ± 2,84% a été observée.
Par contre, par rapport au lot traité avec l’excipient, l’application de la crème contenant 10% de PAS-F1 et du produit de référence provoque une augmentation du pourcentage de la conductance électrique de la peau après 6h de traitement. Comparé au lot traité avec l’excipient, la conductance électrique de la peau augmente de 15,4 ± 4,33% après traitement avec le PAS-F1 et de 9,64 ± 3,85% chez le lot de référence (p<0,05), ce qui signifie que l’extrait PAS-F1 et le madécassoside possèdent un effet hydratant.
D’après les résultats obtenus, l’effet de l’extrait PAS-F1 est similaire à celui obtenu avec le Madécassoside 6 h après application. La conductance électrique de la peau augmente à 15,4 ± 4,33% chez le lot traité avec PAS-F1 contre 9,64 ± 3,88% chez le lot de référence (N.S.). L’effet hydratant de l’extrait PAS-F1 après 6h d’application est identique à celui du madécassoside mais qui disparaît au bout de 24 h (Fig 4).

Table des matières

INTRODUCTION
MATERIEL ET METHODES
I- PARTIE CHIMIQUE
II-PARTIE BIOLOGIQUE
1.Formulation de la crème de base
1.1. Choix de la formulation
1.2. Préparation de la crème
2. Animaux d’expériences .
3. Administration du produit
4. Mesure des différents paramètres
4.1. Détermination de la conductance électrique
4.1.1. Principe de mesure
4.1.2. Calibrage de l’ohmmètre
4.1.3. Détermination de la conductance après application unique de la crème PAS-F1 à 10%
4.1.4. Détermination de la conductance après application biquotidienne de la crème PAS-F1 durant 28 jours
4.2. Mesure de l’épaisseur de la peau
4.3. Mesure de la teneur en eau
5. Etude de la Tolérance
5.1. Test d’irritation cutanée
5.2. Test d’irritation oculaire ou test de DRAIZE
6. Analyse des données
IRESULTATS
I- PHYTOCHIMIE
II- BIOLOGIE
1. Effet de l’application de la crème PAS-F1 à 10% sur la conductance électrique de la peau
1.1. Pourcentage de variation de la conductance électrique de la peau 24h après l’application unique de la crème PAS-F1
1.2. Pourcentage de variation de la conductance électrique de la peau après application biquotidienne de la crème PAS-F1 durant 28jours
2. Effet de l’application biquotidienne de la crème PAS-F1 pendant 28jours sur l’épaisseur de la peau
3. Effet de l’application biquotidienne de la crème PAS-F1 sur la teneur en eau de la peau
4. Test de Tolérance
4.1. Irritation cutanée
4.2. Irritation oculaire
DISCUSSION
CONCLUSION
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES

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