Soutenance mémoire
Extraction de PMT
Des fruits de la plante PMT ont été séchés à l’ombre pendant trois jours, ensuite ils ont été réduits en poudre. Cent grammes de poudre ont été macérés à froid avec 150 ml d’un mélange éthanol-eau (90:10) dans un récipient pendant 15 jours à l’abri de la lumière, à la température ambiante. Après ce délai, la phase éthanolique a été récupérée et décantée. Le surnageant a été évaporé sous vide avec un rotavapor (Büchi®) à la température de 80°C. A la fin de l’évaporation, l’extrait de PMT a été récupéré et gardé à la température ambiante.
Extraction des alcaloïdes des graines de café
Des graines de café ont été broyées, puis un kilogramme de la poudre ainsi obtenue a été introduit dans un erlenmeyer de 5 litres contenant de 10 g de bicarbonate de soude et 3 litres d’eau. Ce mélange a été porté à ébullition pendant 20 minutes et la solution ainsi obtenue a été filtrée sur un papier filtre « wattman n°1 ». Le filtrat a été récupéré et transvasé dans des ampoules à décanter de 200 ml. Cinquante millilitres de dichlorométhane ont été ajoutés dans l’ampoule à décanter et le mélange a été agité pendant 5 mn pour extraire les alcaloïdes. Le mélange a été ensuite laissé se décanter et la phase dichlorométhane a été récupérée et évaporée sous vide à la température de 40°C avec un rotavapor «Büchi®» (figure 2). L’extrait ainsi obtenu a été conservé à l’abri de la lumière à la température ambiante.
La préparation des crèmes contenant les produits à tester
Pour préparer les crèmes contenant des actifs (AT) et les additifs (HE et PMT), les AT ont été préalablement dissouts dans la phase aqueuse et l’HE et le PMT dans la phase huileuse (FONTENEAU J., 2008). Les différentes combinaisons suivantes: AT seul, AT 2% + HE 5%, AT 2% + PMT 1% et AT 2% + HE 5% + PMT 1% ont été préparées séparément (tableau II). Les crèmes ainsi obtenues ont été conditionnées dans des pots hermétiques et placées à l’abri de lumière à 4°C.
Evaluation de l’effet des différentes combinaisons sur la triglycéridémie et cholestérolémie des souris
Un produit amincissant diminue la triglycéridémie et cholestérolémie des animaux (OSTMAN J., BRITTON M., 2001). Il est nécessaire de mesurer leur taux dans le sang de la souris pour voir la différence de l’action de AT en présence de HE et PMT pris séparément et les deux combinés avec AT. Après 28 jours de traitement avec la crème contenant 2% d’alcaloïdes totaux seuls ou associés avec 5% HE et/ou 1% PMT, les souris des différents lots ont été sacrifiées et exsanguinées. Puis le sang a été récupéré dans un tube non héparinisé et le taux sérique de triglycéride et de cholestérol a été déterminé au «Laboratoire en Biologie Médicale» (L.B.M) de la Faculté de Médecine à Faravohitra. La triglycéridémie et la cholestérolémie des souris du lot témoin ont été considérées comme référence.
Effet des alcaloïdes totaux sur le poids des souris obèses
Après un régime alimentaire enrichi au saindoux, les souris sont devenues expérimentalement obèses. L’excipient n’a aucun effet sur cette obésité. Comparées avec le témoin, les différentes combinaisons appliquées diminuent le poids des souris (tableau IV). La crème d’AT (2%) seul diminue de 7,67 ± 1,57% (p<0,01). Cette diminution est égale à 8 ± 0,36% (p<0,01) pour l’association de l’AT (2%) avec le PMT (1%), 9,62 ± 1,92% (p<0,01) pour la combinaison AT (2%) et HE (5%) et 14,42 ± 1,92% (p<0,01) pour la crème d’AT 2% associée à HE (5%) et PMT (1%). Comparé avec l’effet de l’AT (2%) seul, l’ajout de l’extrait PMT à 1% dans cette crème n’influence pas significativement cet effet. Tandis que HE (5%) améliore d’une manière significative (p<0.05) l’effet de l’AT (2%) seul sur le poids. La perte de poids observée chez les souris traitées avec l’association des deux extraits (HE 5% et PMT 1%) incorporés dans la crème est supérieure à celles ayant reçu l’AT (2%) seul (p<0,01). Parmi toutes les autres combinaisons, la crème d’AT 2% associée aux deux extraits, HE (5%) et PMT (1%), donne le meilleur effet sur la diminution du poids de la souris (tableau IV).
DISCUSSION
Après les 30 jours d’engraissement expérimental, pendant lesquels les souris ont reçu un régime hyperlipidique, leur poids, leur tour de taille, le poids de leurs tissus adipeux au niveau de l’abdomen, leur triglycéridémie et leur cholestérolémie ont augmenté (GOYAL R.K. et KADNUR S. V., 2006). Après 28 jours de traitement de ces souris rendues obèses avec les différentes formulations contenant l’extrait AT, leur poids, leur tour de taille, le poids des tissus adipeux de leur abdomen, leur triglycéridémie et leur cholestérolémie ont diminué. Comme la montre les résultats obtenus, la différence entre l’effet de l’AT associé à PMT par rapport à l’effet de l’AT seul est non significative. On peut en déduire que l’extrait PMT 1% n’améliore pas l’action de l’AT. Par contre, avec la combinaison AT et HE 5% cette différence est significative sur la perte de poids des tissus adipeux. Ainsi l’extrait HE améliore l’activité lipolytique de l’AT du café arabica. La diminution du poids et du tour de taille des souris rendues obèses serait due à la fonte des tissus adipeux provoquée par la caféine contenue dans l’AT (GIROTTI-CHANU et CATHERINE, 2006; GEORGEL A., 2008). Or les AT du café contiennent encore un mélange de parathine, de théamine, de liberine, de méthylliberine mais la caféine s’y trouve en forte proportion dans ce mélange (GERARD D., 1993). La présence de la caféine dans l’extrait AT pourrait être la cause de la diminution de ces différents paramètres observés lors de nos manipulations: le poids, le tour de taille, le poids des tissus adipeux, la cholestérolémie et la triglycéridémie. Et la baisse de la triglycéridémie et de la cholestérolémie de la souris pourrait être expliquée par la diminution de la masse graisseuse (GIROTTI-CHANU et CATHERINE, 2006). Une crème appliquée sur la peau entre en contact direct avec l’épiderme, or le stratum corneum de l’épiderme constitue une barrière qui empêche le passage de produits à travers la peau (AGACHE P., 2000). Pourtant la fonte des tissus adipeux au niveau de l’abdomen montrerait que l’AT a pu traverser cette barrière cutanée pour atteindre les tissus adipeux de l’hypoderme. Comme les AT sont hydrosolubles et que l’excipient dans lequel l’AT a été dissout est du type eau dans l’huile, en accord avec DREHER F. (2002) on peut admettre que l’AT serait transporté par l’excipient pour atteindre les adipocytes. Par ailleurs, MARTINI M. C. (2003) a rapporté que la désorganisation des liaisons des lipides intercellulaires du stratum corneum, facilite la pénétration des produits à travers la peau. L’huile essentielle (PERRIN L., 2011), HE pourrait agir sur cette couche et faciliterait ainsi la diffusion de l’AT à travers la peau, ce qui améliore sa pénétration jusqu’aux adipocytes où il exercerait son action lipolytique. Au cours de l’application du mélange AT et PMT, nous avons observé une rougeur au niveau de la peau des souris ce qui est due à une dilation des capillaires cutanés (TUMOUR Q., 1999), cette dilatation des microcirculations cutanées conduit à l’ouverture des pores cutanés (FOUCHARD F. et PATOUILLET C., 2002). L’extrait PMT pourrait agir au niveau du derme en dilatant les capillaires cutanés ce qui augmenterait la diffusion de l’AT vers les adipocytes. Enfin, l’action combinée du mélange d’AT, HE et PMT améliore l’activité lipolytique d’AT, supérieure à celle du mélange AT et HE. Comme nos résultats ont montré que le PMT ne possède pas une activité lipotyque propre. Il agirait donc comme adjuvant (MARTINI M.-C., 2006) en provoquant une vasodilatation du réseau capillaire de l’hypoderme. Ce qui permettrait à l’AT d’exercer son activité lipolytique.
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Table des matières
LISTE DES FIGURES
LISTE DES TABLEAUX
LISTE DES SIGLES ET ABREVIATIONS
INTRODUCTION
MATERIEL ET METHODES
A. Extraction des produits à tester
1. Extraction de l’huile essentielle de la plante HE
2. Extraction de PMT
3. Extraction des alcaloïdes des graines de café
B. Préparation des crèmes contenant les produits à tester
1. Principe de la préparation de l’excipient
2. La préparation des crèmes contenant les produits à tester
C. Tests biologiques
1. Engraissement des souris
2. Préparation des animaux
3. Etude comparative des différentes combinaisons du café associé à HE et/ou PMT
a. Evaluation de l’effet des différentes combinaisons sur le poids des souris
b. Evaluation de l’effet des différentes combinaisons sur la taille des souris
c. Evaluation de l’effet des différentes combinaisons sur la triglycéridémie et cholestérolémie des souris
d. Evaluation des différentes combinaisons sur le tissu adipeux abdominal des souris
D. Analyse des données
RESULTATS
1. Rendement des extractions
2. Effet des alcaloïdes totaux sur le poids des souris obèses
3. Effet des alcaloïdes totaux de café sur le tour de taille des souris
4. Effets des alcaloïdes totaux de café sur le poids des tissus adipeux de la souris
5. Effet des alcaloïdes totaux de café sur la triglycéridémie et cholestérolémie des souris
CONCLUSION
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
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