Techniques de traitement des prélèvements cytologiques chez le chat

Techniques de traitement des prélèvements cytologiques chez le chat

Techniques de traitement des prélèvements histologiques 

Les prélèvements histologiques ont été traités au laboratoire d’histopathologie de l’Ecole Nationale Vétérinaire de Toulouse.

Fixation, Inclusion en paraffine et coupe 

Des prélèvements de 5 mm à 1 cm de côté ont été réalisés et fixés dans du formaldéhyde du commerce dilué à 10% et tamponné à la neutralité pendant 48 heures. Tous les prélèvements ont été enrobés en paraffine après déshydratation (passages successifs dans différents bains d’alcool de concentration croissante : 80°, 95° et 100°) puis éclaircissement dans du toluène. Cette étape d’imprégnation en paraffine a été réalisée dans un automate (HMP 110MICROM). Les prélèvements ont ensuite été inclus en paraffine dans une station d’enrobage (MICROM) et coupés à une épaisseur de 3 µm à l’aide d’un microtome à mouvement vertical (MICROM HM 330). Après récupération sur milieu liquide (bain-marie à 40°C), les coupes ont été étalées sur lame de verre préalablement recouverte d’une goutte d’albumine glycérinée. Elles ont ensuite été séchées à l’étuve (1 heure à 37°C) avant d’être colorées.

Coloration 

Après déparaffinage au toluène et réhydratation progressive de la coupe tissulaire (bains d’alcools à 100°, 95° et eau), une coloration biochimique à l’Hémalun-éosine a été effectuée. Les coupes ont été plongées pendant 2 minutes dans une solution d’Hémalun de Mayer puis rincées à l’eau courante pendant 5 minutes avant de subir une deuxième coloration dans une solution d’Eosine jaunâtre –Erythrosine aqueuse à 2% pendant 30 secondes. Elles ont enfin rapidement été rincées à l’eau courante puis déshydratées par passage dans des alcools de concentration croissante puis placées dans du toluène. Le montage s’est effectué par l’apposition d’une lamelle sur chaque lame, restant fixée par le dépôt préalable d’une noisette de baume synthétique non miscible à l’eau.

Méthodes d’observation et principe de lecture 

L’ensemble des lames de cytologie et d’histologie a été lu conjointement par les Drs Trumel, Bourgès et moi-même.

Lecture des lames cytologiques 

La première étape a permis de vérifier et d’évaluer la qualité des lames et de leur coloration, l’importance de la contamination sanguine. Seules les lames jugées de qualité suffisantes ont été conservées pour être interprétées.La deuxième étape était la lecture analytique des lames qui a consisté à : – apprécier le fond du frottis (présence d’hématies, de mucus, granules, débris cellulaires…) – reconnaître les différentes populations cellulaires présentes. L’essentiel de l’examen cytologique a été réalisé à l’objectif x20 afin de décrire la ou les population(s) cellulaire(s) présente(s) en notant les types cellulaires, les proportions de chaque population et l’organisation des cellules. – à l’objectif ×40 et ×100 les détails cellulaires ont pu être observés, ainsi que les caractéristiques du noyau et du cytoplasme.La qualité des lames cytologiques a été évaluée d’après trois critères :
– la richesse en matériel d’intérêt, – le respect de la structure du tissu, – la morphologie cellulaire.
Pour chaque critère, une note de 0 à 3 a été attribuée avec :
– 0 = nul – 2 = moyen – 1= mauvais – 3 = bon
L’évaluation cytologique a donc permis d’attribuer une note sur 9 pour chaque tissu. Cependant, certains prélèvements n’ont pu recevoir qu’une note partielle, comme le liquide synovial pour lequel on ne peut retrouver de structure réelle et qui a donc été noté sur 6.

Lecture des lames histologiques 

La qualité des lames histologiques a été évaluée par une note de 0 à 3similaire à l’évaluation cytologique :
– 0 = nul le – 2 = moyenne – 1 = mauvaise – 3 = bonne
Il est à noter que certains prélèvements cytologiques n’ont pu être analysés car les lames histologiques servant de référence pour la comparaison cytologique/histologique étaient inexploitables.

Etude comparative cyto-histologique 
La dernière étape, phase d’interprétation a consisté à réaliser le comparatif entre l’observation cytologique et l’observation histologique. Cette étude comparative cyto-histologique chez le chat sain a été illustrée sous forme d’un atlas de photographies et a été développée et détaillée dans la thèse pour un organe en particulier : le pancréas.

Table des matières

INTRODUCTION
PARTIE I : MATERIEL ET METHODE
1) Matériel
1.1) Les animaux
1.2) Les prélèvements
1.3) Le microscope
2) Méthodes
2.1) Techniques de traitement des prélèvements cytologiques
2.1.a) Cytoponction à l’aiguille fine
2.1.b) Réalisation des étalements cellulaires Technique par étirement entre deux lames perpendiculaires
2.1.c) L’empreinte ou calque Technique de coloration May-Grünwald-Giemsa Rapide
2.1.d) Le raclage
2.1.e) Tableau récapitulatif des techniques de prélèvements cytologiques
2.1.f) Coloration des lames cytologiques
2.2) Techniques de traitement des prélèvements histologiques
2.2.a) Fixation, inclusion en paraffine et coupe
2.2.b) Coloration
2.3) Méthodes d’observation et principe de lecture
2.3.a) Lecture des lames cytologiques
2.3.b) Lecture des lames histologiques
2.3.c) Etude comparative cyto-histologique
PARTIE II : RESULTATS
II.A) Evaluation de la qualité des lames cytologiques et histologiques
II.B) Etude comparative histologique et cytologique d’un organe particulier, le pancréas
II.B.1) Etude descriptive histologique et cytologique du pancréas chez un chat sain
II.B)1)a) Description des lames histologiques II.B)1)b) Description des lames cytologiques
II.B.2) Discussion
II.B.2)a) Comparaison des lames observées et des données bibliographiques
II.B.2)b) Comparaison des lames cytologiques et histologiques
BIBLIOGRAPHIE

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