Criblage phytochimique

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Préparation de l’extrait MK27

Les feuilles de la plante utilisées dans ce mémoire ont été récoltées dans la région d’Analamanga (Madagascar) au mois de décembre 2016.
Elles ont été séchées à la température ambiante dans un endroit aéré et à l’abri de la lumière pendant 15 jours. Puis elles ont été broyées à l’aide d’un broyeur à marteau électrique (BROOK CROMPTON, Séries 2000). Deux cent grammes de la poudre ainsi obtenue ont été macérés dans un mélange éthanol – eau (60 : 40) à la température ambiante pendant 72 heures. Le macérât a été filtré à l’aide du coton hydrophile et le filtrat obtenu a été évaporé à l’aide d’un distillateur à la température de 80°C, puis un bain marie, à la température de 100 °C (Figure 1).

Criblage phytochimique

Un criblage phytochimique a été effectué sur l’extrait MK27 pour déterminer les familles chimiques qu’il contient. La méthode utilisée a été basée sur la réaction entre un réactif spécifique et la famille chimique correspondante, cette réaction se traduit par un changement de coloration ou par la formation de précipité (FONG H. H. S. et coll., 1977) (Tableau I). L’intensité de cette réaction traduit la teneur de la famille chimique recherchée.
Les signes suivants ont été utilisés pour exprimer l’intensité de cette réaction :
+++ : coloration intense ou fort précipité.
++ : coloration moyenne ou précipité moyen. + : coloration faible ou faible précipité.

PARTIE PHARMACOLOGIQUE

L’activité de l’extrait MK27 sur la diurèse a été étudiée in vivo chez le cochon d’inde, en mesurant le volume de l’urine excrétée en 24 h, son pH ainsi que le taux de sodium et de potassium qu’elle contient (COLOT M., 1972).

Animaux d’expérimentation

Des cochons d’Inde des deux sexes, âgés de trois mois, pesant entre 225 et 275 gramme ont été utilisés. Ils ont été élevés au sein de l’animalerie de LPGPC et nourris avec des feuilles fraîches de graminées.

Étude de l’activité de l’extrait Mk27 sur la diurèse

Des animaux mis à jeun pendant 18 h ont été utilisés. Ils ont été répartis en 4 lots : 1 lot témoin et 3 lots traités avec l’extrait. Ils ont tous reçu une surcharge hydrique de 50 ml d’eau distillée par kilogramme de la masse corporelle (SANOGO R. et coll., 2009). Trente minutes après la surcharge hydrique, les animaux du lot témoin ont reçu 10 ml d’eau distillée par kilogramme de masse corporelle, tandis que les animaux des 3 autres lots ont reçu l’extrait MK27 aux doses de 100, 200 et 400 mg/Kg. L’extrait a été administré par voie orale dans un volume de 10 ml par kilogramme de la masse corporelle de l’animal (SHAMKUWAR P.B. et PAWAR D.P., 2013). Tout de suite après, chaque animal a été placé dans une cage à métabolisme individuelle pendant 24 heures (Figure 2), et le volume de l’urine recueillie pendant ces 24 heures a été mesuré à l’aide d’un éprouvette graduée pour étudier l’effet de l’extrait sur la diurèse.
L’activité diurétique de l’extrait a été exprimée par l’excrétion urinaire volumétrique (EUV en %) suivant la formule (KAU S. T. et coll., 1984) :
=VA ×100
Avec VE : Volume urinaire (ml)
VA : Volume de surcharge hydrique (ml)
La valeur de l’excrétion urinaire volumétrique suivante a été utilisée pour vérifier l’activité diurétique de l’extrait MK27:
 EUV < 80 % : Activité antidiurétique
 80 % < EUV˂ 100 % : Pas d’activité diurétique
 100 % < EUV˂ 130 % : Activité faible diurétique
 130 % < EUV ˂ 150 % : Activité moyenne diurétique
 150 % > EUV : Forte activité diurétique

Étude de l’activité de l’extrait Mk27 sur le pH urinaire

Le pH de l’urine récupérée pendant les 24 heures a été mesuré à l’aide d’un pH mètre (PIERRON®) (Figure 3).

Étude de l’effet de l’extrait MK27 sur l’excrétion urinaire de Na+ et de K+

La natriurie et la kaliurie de l’urine émise pendant 24 heures chez les animaux traités avec l’extrait aux doses respectives de 100, 200 et 400 mg/Kg ont été dosées au Laboratoire de Pharmacologie Générale, de Pharmacocinétique et de Cosmétologie à l’aide d’un spectrophotomètre à flamme (Figure 4).
Figure 4. Spectrophotomètre à flamme.

EXPRESSION ET ANALYSE DES RÉSULTATS

Les résultats obtenus lors des différentes manipulations ont été exprimés sous forme de moyenne ± e.s.m (̅̅̅ ± e.s.m). Les moyennes ont ensuite été comparées entre elles en utilisant le test t de Student, et la différence a été considérée comme significative pour une valeur de P inférieure à 0,05.

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Table des matières

I. INTRODUCTION
II. MATÉRIELS ET MÉTHODES
A. PARTIE CHIMIQUE
1. Préparation de l’extrait MK27
2. Criblage phytochimique
B. PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1. Animaux d’expérimentation
2. Étude de l’activité de l’extrait Mk27 sur la diurèse
3. Étude de l’activité de l’extrait Mk27 sur le pH urinaire
4. Étude de l’effet de l’extrait MK27 sur l’excrétion urinaire de Na+ et K+
C. EXPRESSION ET ANALYSE DES RÉSULTATS
III. RÉSULTATS
A. PARTIE CHIMIQUE
1. Rendement de l’extraction
2. Résultats du criblage phytochimique
B. PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1. Effet de l’extrait MK27 sur la diurèse
2. Effet de l’extrait MK27 sur le pH urinaire
3. Effet de l’extrait MK27 sur la natriurie
4. Effet de l’extrait MK27 sur la kaliurie
IV. DISCUSSION
V. CONCLUSION
VI. BIBLIOGRAPHIE