Exemples de dรฉcouverte de molรฉcules naturelles actives
Les civilisations anciennes ont utilisรฉ diverses parties de plantes et dโanimaux afin dโen รฉvaluer les effets. Des sources dโeffets thรฉrapeutiques et cosmรฉtiques ont รฉtรฉ remarquรฉes et ont ainsi รฉtรฉ transmises, souvent oralement, de gรฉnรฉration en gรฉnรฉration dans des pratiques comme la mรฉdecine traditionnelle chinoise, lโayurvรฉdique, etc.
Origine animale
Il y a au moins 5000 ans, en Asie et en Afrique, une substance toxique : la cantharidine qui รฉtait utilisรฉe comme aphrodisiaque ou pour soigner l’angine de poitrine , รฉtait extraite de la mouche espagnole. Le lucane produisait un diurรฉtique qui soignait la goutte, les rhumatismes, l’otite ou les convulsions . On retrouve รฉgalement le miel, dont on commence seulement ร percevoir l’รฉtendue des applications en mรฉdecine comme cicatrisant, antiseptique et antibactรฉrien. Enfin, en Amรฉrique latine, les femmes dรฉposaient les escargots sur leur peau afin de profiter de leurs vertus adoucissantes et rรฉparatrices ; le mucus dโescargot est aujourdโhui intรฉgrรฉ dans la composition de certains produits cosmรฉtiques.
Origine vรฉgรฉtale
Les plantes ont aussi รฉtรฉ largement utilisรฉes pour leurs propriรฉtรฉs biologiques, un grand nombre de leurs molรฉcules a รฉtรฉ utilisรฉ pour diverses applications thรฉrapeutiques ou cosmรฉtiques. On retrouve par exemple, le curare, une substance extraite de certaines lianes dโAmazonie, qui รฉtait utilisรฉ par les Amรฉrindiens pour enduire les flรจches de chasse afin de provoquer une paralysie des muscles de la proie . Ou encore, lโextrait de belladone qui รฉtait instillรฉ dans les yeux des Italiennes รฉlรฉgantes afin de les faire briller, en augmentant la pression oculaire et en dilatant la pupille sous lโaction de lโatropine, et ainsi accroitre leur attirance. Aujourdโhui, ce principe actif est utilisรฉ par les ophtalmologues pour dilater les pupilles lors dโun fond dโลil .
La comprรฉhension et lโidentification des composรฉs responsables des propriรฉtรฉs biologiques diverses et variรฉes des organismes vivants, observรฉes et utilisรฉes par nos ancรชtres, est rendue possible grรขce ร la chimie des produits naturels. En effet, lโรฉtude chimique avec des outils modernes de diffรฉrents extraits a conduit ร lโidentification structurale de leurs principes actifs, ร la dรฉmonstration de leur activitรฉ biologique et ร la mise au point de nouveaux produits cosmรฉtiques et thรฉrapeutiques .
Chimie des produits naturels
Le concept de la chimie moderne des produits naturels remonte au XVIIIe siรจcle. Elle รฉtait considรฉrรฉe comme la chimie des substances qui composent les plantes et les animaux, dont les principes avaient รฉtรฉ รฉtablis en 1789 par le franรงais Antoine Lavoisier. Elle a permis audelร de lโutilisation des extraits, lโรฉvolution des recherches vers la dรฉtermination des composรฉs chimiques actifs issus des plantes. Nรฉanmoins, lโintรฉrรชt de la chimie des produits naturels a connu un vรฉritable dรฉclin en raison dโun manque dโoutils analytiques adaptรฉs, de programmes universitaires et industriels dรฉdiรฉs, ainsi que la faiblesse des ressources financiรจres de la recherche et du dรฉveloppement de nouvelles dรฉcouvertes .
Au XIXe siรจcle, un regain dโintรฉrรชt a eu lieu pour les produits naturels en raison de leur impact sur divers domaines de la science, des progrรจs techniques et de lโactivitรฉ รฉconomique. La comprรฉhension des produits naturels et de leur chimie conduit au dรฉveloppement des approches de purification, dโanalyse, de dรฉtermination de structure et de fonction, de dynamique chimique et mรฉtabolique interrelationnelle. Ainsi une meilleure comprรฉhension des produits plus complexes et de leurs implications dans des utilisations analytiques, de bioingรฉnierie et mรฉdicales a รฉtรฉ atteinte.
Mรฉtabolites secondaires ou spรฉcialisรฉs vรฉgรฉtaux
ร ce jour, plus de 250 000 mรฉtabolites secondaires ont รฉtรฉ rรฉpertoriรฉs dans le dictionnaire des produits naturels . Ils sont รฉlaborรฉs ร partir des mรฉtabolites primaires par des voies mรฉtaboliques gรฉnรฉtiquement contrรดlรฉes, et leur production dรฉpend de nombreux facteurs extrinsรจques et intrinsรจques. Les mรฉtabolites secondaires vรฉgรฉtaux sont classรฉs selon leur biogรฉnรจse ou biosynthรจse ; on retrouve trois grands groupes chez les plantes : les composรฉs phรฉnoliques, les composรฉs azotรฉs et les composรฉs terpรฉniques. Lโensemble des mรฉtabolites primaires et de ces grandes classes de mรฉtabolites secondaires reprรฉsente le mรฉtabolome de la plante .
Composรฉs phรฉnoliques
Ce sont les mรฉtabolites secondaires les plus largement distribuรฉs, ils sont omniprรฉsents dans le rรจgne vรฉgรฉtal, mรชme si le type de composรฉs prรฉsents varie selon lโespรจce considรฉrรฉe . Cโest un groupe qui est difficile ร dรฉfinir, ces composรฉs contiennent au moins un noyau benzรฉnique porteur dโun groupement hydroxyle libre ou engagรฉ dans une autre liaison (รฉther, ester, hรฉtรฉroside, etc.). Ce groupe comprend des familles provenant de deux voies biogรฉnรฉtiques dโaromagรฉnรจse : les phรฉnols simples, coumarines, lignanes, stilbรจnes, chalcones, flavonoรฏdes, xanthones et tanins provenant de lโacide shikimique ainsi que les quinones et orcinols provenant de la voie de lโacรฉtate .
Les composรฉs phรฉnoliques sont considรฉrรฉs comme jouant un rรดle clรฉ en tant que composรฉs de dรฉfense lorsque des stress environnementaux, tels que la lumiรจre intense, les basses tempรฉratures, l’infection par des agents pathogรจnes, les herbivores et la carence en nutriments, peuvent entraรฎner une production accrue de radicaux libres et d’autres espรจces oxydatives dans les plantes. Ils sont principalement utilisรฉs pour leurs effets bรฉnรฉfiques sur la santรฉ comme antioxydants, et peuvent รชtre ajoutรฉs comme additifs dans les produits des industries agroalimentaires, pharmaceutiques et cosmรฉtiques. Il existe notamment certains produits mรฉdicinaux ร base de plantes oรน les principes actifs peuvent รชtre prรฉsents sous forme de promรฉdicaments et agir en synergie . Par exemple, les polyphรฉnols ont donnรฉ naissance ร des mรฉdicaments intรฉressants et la FDA (Food and Drug Administration) amรฉricaine a approuvรฉ un extrait de polyphรฉnols de thรฉ vert enrichi (Mitsui Norin, Polyphenon E) en tant que pommade pour le traitement des verrues gรฉnitales . On retrouve รฉgalement le resvรฉratrol, un stilbรจne extrait de la vigne et utilisรฉ dans des produits cosmรฉtiques pour lutter contre le vieillissement cellulaire (Caudalie, Resvรฉratrol-lift).
Composรฉs azotรฉs
Ce groupe comprend les alcaloรฏdes, les betalaรฏne, les hรฉtรฉrosides cyanogรจnes et les glucosinolates. Nรฉanmoins, les alcaloรฏdes, principaux composants de ce groupe, sont des substances azotรฉes, basiques et hรฉtรฉrocycliques .
Selon lโacide aminรฉ et mรฉtabolite primaire prรฉcurseur, on retrouve dans la famille des alcaloรฏdes des dรฉrivรฉs de lโornithine, de la lysine, de lโacide nicotinique, de la phรฉnylalanine, de la tyrosine, du tryptophane, de lโhistidine, etc. Cette famille contient dโimportants mรฉtabolites secondaires avec des propriรฉtรฉs pharmacologiques dโintรฉrรชt thรฉrapeutique, il en existe environ 12 000 qui seraient rรฉpertoriรฉs ร ce jour. Parmi les exemples les plus remarquables des produits naturels vรฉgรฉtaux prรฉsents dans la pharmacopรฉe actuelle et dans la liste des mรฉdicaments essentiels de lโorganisation mondiale de la santรฉ, figurent les vinca alcaloรฏdes (vincristine, vinblastine) isolรฉs de la pervenche de Madagascar catharanthus roseus.
Composรฉs terpรฉniques
Cโest le groupe le plus vaste des mรฉtabolites secondaires. Les composรฉs sont formรฉs par assemblage dโun nombre entier dโunitรฉs dโisoprรจne. On retrouve dans cette classe les monoterpรจnes C10 (2 unitรฉs), les sesquiterpรจnes C15 (3 unitรฉs), les diterpรจnes C20 (4 unitรฉs), les triterpรจnes C30 (6 unitรฉs) dont les saponines, les stรฉroรฏdes C27 (6 unitรฉs โ 3C) et les tรฉtraterpรจnes C40 (8 unitรฉs) . Les terpรจnes volatils sont souvent responsables de lโodeur des vรฉgรฉtaux et sont extraits sous forme dโhuiles essentielles pour la parfumerie. Certains terpรจnes ont des rรดles biologiques importants (hormones, vitamines). Parmi les molรฉcules bioactives appartenant ร cette famille, on retrouve l’artรฉmisinine, une lactone sesquiterpรฉnique contenant un peroxyde. Isolรฉ d’Artemisia annua, ce composรฉ est devenu un mรฉdicament de rรฉfรฉrence pour le traitement du paludisme.
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Table des matiรจres
Chapitre 1 โ Introduction Gรฉnรฉrale
I. Produits Naturels
A. Prรฉsentation des produits naturels
B. Exemples de dรฉcouverte de molรฉcules naturelles actives
C. Chimie des produits naturels
D. Mรฉtabolites secondaires ou spรฉcialisรฉs vรฉgรฉtaux
1) Composรฉs phรฉnoliques
2) Composรฉs azotรฉs
3) Composรฉs terpรฉniques
II. Profilage des Mรฉtabolites et Mรฉtabolomique
A. Dรฉfinitions
1) Profilage des mรฉtabolites
2) Mรฉtabolomique
B. Techniques analytiques
1) Chromatographie en Phase-Liquide
2) Spectromรฉtrie de masse
3) Couplage UHPLC-QTOF-HRMS
III. Dรฉrรฉplication et annotation des mรฉtabolites
A. Dรฉfinition et principe
B. Histoire
C. Avancรฉes de la dรฉrรฉplication
D. Annotation des mรฉtabolites
1) รlucidation de structure de novo
2) Dรฉrรฉplication basรฉe sur les bases de donnรฉes
IV. Rรฉseaux Molรฉculaires
A. Dรฉfinition et principe
B. Gรฉnรฉration des rรฉseaux molรฉculaires et visualisation
1) Gรฉnรฉration des donnรฉes spectrales
2) Prรฉtraitement et transfert des donnรฉes MS
3) Gรฉnรฉration des rรฉseaux molรฉculaires
4) Visualisation des rรฉseaux molรฉculaires
C. Interprรฉtation des rรฉseaux molรฉculaires
D. Quelques avancรฉes offertes par les rรฉseaux molรฉculaires
V. Objectifs de la Thรจse
Chapitre 2 โ Dรฉveloppement et optimisation des rรฉseaux molรฉculaires afin dโรฉtudier la production des lignanes dans les cals cellulaires de Linum usitatissimum L.
I. Introduction
II. Cals cellulaires de Linum usitatissimum L.
A. Prรฉparation dโรฉchantillons
1) Mise en place des cals cellulaires
2) Extraction
B. Analyses UHPLC-MS/HRMS
III. Principaux paramรจtres influenรงant les rรฉseaux molรฉculaires
A. Nombre de prรฉcurseurs
B. รnergies de collision
C. Fichiers de transfert des donnรฉes spectrales
D. Nombre minimum de correspondances des spectres MS/MS
E. Scores cosine
IV. Rรฉseaux molรฉculaires de Linum usitatissimum
V. Comparaison de production de lignanes
VI. Conclusion
Chapitre 3 โ Approche mรฉtabolomique et rรฉseau molรฉculaire pour le criblage et la caractรฉrisation de biomarqueurs
I. Introduction
II. Mรฉtabolomique Non-Ciblรฉe
A. Prรฉparation des รฉchantillons
B. Acquisition des donnรฉes
C. Prรฉtraitement des donnรฉes
D. Analyses Statistiques
1) Analyses univariรฉes
2) Analyses multivariรฉes
E. Annotation des biomarqueurs
F. Interprรฉtation biologique
III. Criblage et identification de biomarqueurs
A. Prรฉparation des รฉchantillons
1) Culture en mรฉsocosme
2) Extraction
B. Acquisition des donnรฉes
C. Prรฉtraitement des donnรฉes
D. Analyses statistiques
E. Caractรฉrisation des composรฉs
1) Rรฉseau molรฉculaire des extraits bruts
2) Caractรฉrisation basรฉe sur lโรฉlucidation de novo
IV. Conclusion
Chapitre 4 โ Combinaison de rรฉseaux molรฉculaires et fractionnement CPC pour cibler des molรฉcules dโintรฉrรชt cosmรฉtique
I. Introduction
II. Dรฉveloppement mรฉthodologique
A. Les plantes
1) Artemisia annua L.
2) Eclipta alba L.
B. Prรฉparation des รฉchantillons
1) Culture de la matiรจre vรฉgรฉtale
2) Extraction
C. Fractionnement par Chromatographie de Partage Centrifuge (CPC)
D. รvaluation des activitรฉs biologiques
1) Activitรฉ antioxydante
2) Activitรฉ anti-enzymatique
3) Activitรฉ cellulaire
E. รtude phytochimique et รฉlucidation structurale
1) Rรฉseaux molรฉculaires de lโextrait brut
2) Identification des composรฉs bioactifs
III. Criblage et identification des molรฉcules bioactives
A. Artemisia annua L.
1) Rรฉseau molรฉculaire de lโextrait brut
2) Activitรฉ antioxydante
3) Identification des molรฉcules bioactives
4) Viabilitรฉ cellulaire
B. Eclipta alba L.
1) Rรฉseau molรฉculaire de lโextrait brut
2) Activitรฉs biologiques
3) Identification des molรฉcules bioactives
4) Viabilitรฉ cellulaire
IV. Conclusion
Chapitre 5 โ Conclusion Gรฉnรฉrale
Perspectives
Annexes
Rรฉfรฉrences bibliographiques