Analyse chimique des triterpènes de C. asiatica

Analyse chimique des triterpènes de C. asiatica

Constituants chimiques

En 1940, la principale substance active du Centella asiatica a été isolée : il s’agit de l’asiaticoside. D’autres constituants (alcaloïdes, principes amers, saponines…) ont été découverts par la suite et les études se succèdent.La première extraction sèche a seulement été produite en 1941, trois années avant que P. Boiteau isole ses principes actifs. Les progrès de la chimie ont permis la réalisation d’extrait titré (TECA) contenant 60 % d’acide asiatique et madécassique et 40 % d’asiaticoside qui est utilisé dans les préparations topiques à des concentrations comprises entre 0,1 et 1%.Les composants chimiques du Centella asiatica sont : l’asiaticoside, les hétérosides, le madécassoside, l’acide asiatique, l’acide madécassique, les Génines (Dermatol et al., 2006), l’acide ursolique, l’acide pamolique, l’acide rosmarinique, l’acide corosolique et l’acide 3 épimislimique (Yoshida et al., 2005).

Analyse chimiques des triterpènes par CLHP

La chromatographie permet la séparation ou la purification d’un ou de plusieurs composés d’un mélange en vue de leur identification et de leur quantification. Il existe trois principaux types de chromatographie: la chromatographie en phase gazeuse (CPG), la chromatographie en phase liquide à haute performance (CLHP) et la chromatographie en couche mince (CCM).Pour le dosage des triterpènes de C. asiatica, la CLHP est la méthode la plus utilisée et l’asiaticoside est la molécule de référence utilisée. La pharmacopée européenne (2002) propose un dosage par CLHP en utilisant comme référence seulement l’asiaticoside.Schaneberg et al. (2003) ont développé une méthode de dosage de six triterpènes de C. asiatica. Randriamampionona et al. (2007) ont utilisé une version modifiée de la méthode d’Inamdar et al. (1996). Cette dernière méthode reste la plus utilisée par l’IMRA dans le cadre de la quantification des triterpènes chez C. asiatica.Récemment, d’autres scientifiques comme Rafamantanana et al. (2009) ; Thomas et al. (2010) proposent l’utilisation de la chromatographie sur couche mince haute performance (HPTLC ou High Performance Thyn Layer Chromatography) pour le dosage des osides avec plusieurs échantillons simultanément. Cette méthode pourrait être utilisée dans l’avenir dans un dosage de routine de cette plante.

Cadre générale de l’étude

Dans le cadre de l’utilisation durable de Centella asiatica à Madagascar, l’Institut Malgache de Recherches Appliquées (IMRA) en collaboration avec ses partenaires a mis en place un programme de recherche sur la conservation et la domestication de Centella asiatica. Ce programme vise à comprendre les différents éléments susceptibles d’être impliqués dans la culture de cette plante comme le morphotype, le chémotype et le génotype.Cette étude a été focalisée sur l’évaluation des teneurs en principes actifs des accessions de Centella asiatica se trouvant dans la partie nord de Madagascar. Les accessions de Centella asiatica dans cette partie du pays n’ont pas encore fait l’objet d’études poussées par l’organisme d’accueil de mon stage de mémoire de fin d’étude.

Le rapport de stage ou le pfe est un document d’analyse, de synthèse et d’évaluation de votre apprentissage, c’est pour cela rapport gratuit propose le téléchargement des modèles gratuits de projet de fin d’étude, rapport de stage, mémoire, pfe, thèse, pour connaître la méthodologie à avoir et savoir comment construire les parties d’un projet de fin d’étude.

Partie 1 : Généralités
1.1 Synthèses bibliographiques
1.1.1 Centella asiatica
1.1.1.1 Botanique
1.1.1.2 Morphologie
1.1.1.3 Ecologie
1.1.1.4 Constituants chimiques
1.1.1.5 Utilisations
1.1.1.6 Importance économique
1.1.2 Analyse chimiques des triterpènes par CLHP
1.1.3 Conservation ex situ
1.2. Cadre générale de l’étude
Partie 2 : MATERIEL ET METHODES
2.1 Récolte de matériel végétal sur terrain
2.1.1 Sites d’étude
2.1.2 Récolte
2.2 Mise en culture sous serre
2.3 Quantification de biomasse foliaire
2.4 Analyse chimique des triterpènes de C. asiatica
2.4.1 Extraction des échantillons
2.4.2 Analyse par CLHP
2.5 Culture in vitro des accessions élites
2.5.1 Matériel végétal
2.5.2 Désinfection des explants
2.5.3 Inoculation des explants
2.5.4 Milieux de culture
2.5.5 Condition d’incubation
Partie 3 : RESULTATS
3.1 Accessions de Centella asiatica récoltées
3.2 Évaluation de la biomasse
3.3 Teneur en principes actifs
3.3.1 Analyse des produits de références
3.3.2 Teneur en triterpènes totaux des plantes sauvages
3.3.3 Teneur en principes actifs des plantes cultivées en serre
3.4 Quantité de triterpènes en fonction de la biomasse
3.5 Culture in vitro
3.5.1 Germination in vitro
3.5.2 Cultures in vitro établies avec des bourgeons terminaux
Partie 4 : DISCUSSIONS
4.1 ACCESSIONS DE CENTELLA RECOLTEES
4.2 Culture en serre
4.3 DOSAGES DES PRINCIPES ACTIFS
4.3.1. Dosage des triterpènes pour les plantes sauvages
4.3.2. Dosage des triterpènes pour les plantes transplantées en serre
4.3.3. Comparaison de la teneur en triterpènes des plantes récoltées à l’état sauvage et cultivées en serre.
4.4 Relation entre la teneur en triterpènes et la production de biomasse.
4.5 CULTURE IN VITRO
4.5.1 L’Initiation de la culture aseptique
4.5.2 La multiplication in vitro
Conclusions et perspectives
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES