Soutenance mémoire
MATERIEL ET REACTIFS
Matériel végétal
Le matériel végétal est constitué de feuilles de Terminalia mantaly H. Perrier récoltées aux alentours du Département d’Odontologie de la Faculté de Médecine de Pharmacie et d’Odontologie de Dakar (FMPO /UCAD), au mois d’août de l’année 2017. Ces feuilles ont été séchées à l’ombre dans un milieu aéré avant d’être réduites en poudre par le biais d’un brouilleur électrique. La poudre ainsi obtenue a été conservée dans un sachet à labri de la lumière.
Matériel de laboratoire
● Broyeur de marque BRABENDER
● Balance de marque ACCURAT 500
● Balance de précision de marque ORNA
● Evaporateur rotatif de marque Stuart
● Réfrigérant type CH-250
● Dessiccateur
● Eprouvette
● Erlenmeyer
● Tube à essai
● Spectrophotomètre de marque BTS.50
● Spatule
● Micropipettes
● Ampoule à décanter
● Micropipettes
● Béchers
● Ballon 500 mL
● Ballon à fond plat 1000 mL
● Ballon à fond rond 1000 mL
● Entonnoir
● Eprouvette
Activité antioxydante par la méthode FRAP
Protocole expérimental
Le pouvoir réducteur a été déterminé suivant la méthode décrite par Bassene (2012). Ainsi, 400 µL de la solution à tester (extrait, fraction ou acide ascorbique) en solution aqueuse, à une concentration donnée (7,81 – 15,62 – 31,25 – 62,5 – 125 et 250µg/mL) ont été mélangés avec 1 mL de la solution de tampon phosphate (0,2 M; pH 6,6) et 1 mL de ferricyanure de potassium [K3Fe(CN)6] à 1% dans un tube à essai. Ensuite 1 mL d’acide trichloracétique (10%) y est ajouté après une incubation de 30 minutes à 50 ˚C. Le tout est ensuite centrifugé à 3000 tours par minute pendant 10 minutes. Puis 1 mL du surnageant a été mélangé avec 1 mL d’eau distillée et 200 µL de FeCl3 (0,1%). Après une incubation de 15 minutes à l’abri de la lumière, les absorbances sont lues à 700 nm à l’aide d’un spectrophotomètre. Un tube blanc (constituant le témoin négatif), où l’extrait est remplacé par l’éthanol, a été préparé parallèlement et traité de la même manière que les produits à tester. Trois essais sont effectués pour chaque concentration de produit testé (n=3).
Expression des résultats
Pour explorer les résultats, la méthode utilisée par la majorité des auteurs est de tracer le graphe des pouvoirs réducteurs obtenus en fonction des concentrations des différents produits testés. L’augmentation de l’absorbance correspond à une croissance du pouvoir réducteur des produits testés (Kanoun, 2011). Les résultats ont été exprimés en pouvoir réducteur selon la formule suivante :
PR = [(Ax-A0) / Ax] × 100
PR : pouvoir réducteur (en %) A0 : absorbance du blanc
Ax : absorbance du produit testé.
Analyses statistiques
Les analyses statistiques des résultats ont été réalisées par une analyse normale des variantes (ANOVA) utilisant le test de Fisher. La différence est considérée significative si p<0,05 versus témoin négatif.
RESULTATS
Rendements d’extraction et de fractionnement
L’extraction de 50 g de poudre des feuilles de Terminalia mantaly a donné un poids d’extrait sec de 7,63 g, correspondant à un rendement d’extraction de 15,27%. Les fractions dichlorométhanique, d’acétate d’éthyle et aqueuse ont eu des rendements respectifs de 13,10%, 19,65% et 64,22% par rapport à l’extrait sec hydro-éthanolique.
DISCUSSION
Un mélange hydro-éthanolique dans les proportions 20v/80v nous a permis de faire l’extraction. Ce mélange a la capacité d’extraire des composés polaires tels que les polyphénols qui sont parmi les principaux composants des plantes à activité anti-oxydante (Fall et al., 2015; Sarr et al., 2015). Des études antérieures ont montré que les feuilles de Terminalia mantaly renferment des tanins, des alcaloïdes, des flavonoïdes et des phénols (Dlama et al., 2016). L’extraction des composés polyphénoliques est une étape cruciale pour la valorisation de ces principes actifs reconnus pour leur pouvoir antiradicalaire élevé (Bonnaillie, 2012).
Le fractionnement liquide-liquide de l’extrait hydro-éthanolique dissout dans de l’eau par des solvants de polarité croissante (dichlorométhane puis l’acétate d’éthyle) nous a permis d’obtenir successivement trois fractions :
– une fraction dichlorométhanique contenant des composés apolaires ;
– une fraction d’acétate d’éthyle avec des composés de polarité intermédiaire;
– une fraction aqueuse contenant les composés les plus polaires.
Le rendement le plus faible par rapport à l’extrait hydro-éthanolique est celui de la fraction dichlorométhanique (13,10%) suivi par celle de la fraction d’acétate d’éthyle (19,65%). La fraction aqueuse ayant le rendement le plus élevé (64,22%). Ces résultats suggèrent que les principes actifs les plus représentés dans les feuilles de Terminalia mantaly sont majoritairement les composés polaires. L’objectif principal de notre étude est la recherche de l’activité antiradicalaire de l’extrait hydro-éthanolique des feuilles de T. mantaly et de ses fractions par la méthode FRAP.
La méthode FRAP permet une analyse de la recherche de l’activité antioxydante. Elle est rapide et facile à exécuter. Cette méthode est basée sur la capacité des polyphénols à réduire l’ion ferrique (Fe3+) en ion ferreux (Fe2+). La puissance de réduction est considéré comme étant l’un des mécanismes antioxydants (Karagozler et al., 2008). A toutes les concentrations testées, le pouvoir antioxydant de l’extrait et de ses fractions a été dose-dépendant. Les résultats obtenus ont montré que l’extrait hydro-éthanolique des feuilles de T. mantaly et ses fractions ont un fort pouvoir réducteur. Ce qui signifie que l’extrait et ses fractions possèdent une nette activité antioxydante. Par ailleurs à toutes les concentrations testées, il a été noté que les fractions polaires telles que celles d’acétate d’éthyle et aqueuse ont été les fractions les plus actives avec des PR minimums respectifs de 62,61% et 61,65% (à la concentration de 7,81 µg/ml) et des PR maximums respectifs de 97,05% – 97,43% (à la concentration de 250 µg/ml). Cela peut être expliqué par le fait que la fraction d’acétate d’éthyle et la fraction aqueuse sont très concentrées en composés polaires (polyphénols), ces derniers étant les principaux responsables de l’activité antioxydante. Par contre la vit C et la fraction dichlorométhanique (apolaire) ont eu un effet réducteur faible par rapport aux fractions précédentes, avec des PR minimums respectifs de 48,05% et 35,8% (à la concentration de 7,81 µg/ml) et des PR maximums respectifs de 91,95% et 81,13% (à la concentration de 250 µg/ml). L’activité moins importante de la fraction dichlorométhanique s’expliquerait par son apolarité. En effet les polyphénols, composés polaires, connus pour leur activité antioxydante ne seraient pas bien extraits par les solvants apolaires (Bassène, 2012).
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Table des matières
INTRODUCTION
PREMIERE PARTIE : ETUDE BIBLIOGRAPHIQUE
CHAPITRE I : PRESENTATION DE LA PLANTE
I.1 Systématique
I.2 Description botanique
I.2.1 Port
I.2.2 Feuilles
I.2.3 Inflorescence
I.2.4 Fruits
I.3 Répartition géographique
I.4 Chimie
I.5 Etudes réalisées sur la pharmacologie
I.6 Emplois
I.6.1 Emplois thérapeutiques
I.6.2 Autres emplois
CHAPITRE II : GENERALITES SUR LE STRESS OXYDATIF
II.1 Définition du stress oxydatif
II.2 Définition d’un radical libre
II.3 Différents types de radicaux libres
II.4 Origine des radicaux libres
II.4.1 Origine cellulaire
II.4.2 Sources exogènes des radicaux libres
II.5 Actions biologiques des radicaux libres
II.5.1 Effets protecteurs
II.5.2 Effets délétères
II.6 Les antioxydants
II.6.1 Les antioxydants endogènes
II.6.2 Antioxydants exogènes
II.7 Pathologies associées au stress oxydant
II.7.1 Stress oxydant et maladie d’Alzheimer
II.7.2 Stress oxydant et maladie de Parkinson
II.7.3 Stress oxydant et Cancer
CHAPITRE III : METHODES D’ETUDE DE L’ACTIVITE ANTIOXYDANTE
DEUXIEME PARTIE : ETUDE EXPERIMENTALE
CHAPITRE I : MATERIEL ET METHODES
I.1 Matériel et réactifs
I.1.1 Matériel végétal
I.1.2 Matériel de laboratoire
I.1.3 Principaux réactifs utilisés
I.2 Méthodes d’études
I.2.1. Extraction et fractionnement
I.2.2. Activité antioxydante par la méthode FRAP
CHAPITRE II : RESULTATS
II.1. Rendements d’extraction et de fractionnement
II.2. Activité antioxydante par la méthode FRAP
II.2.1 Extrait hydro-éthanolique
II.2.2 Fraction dichlorométhique
II.2.3 Fraction acétate d’éthyle
II.2.4 Fraction aqueuse
II.2.5 Acide ascorbique
II.2.6 Résumé des PR des produits testés
CHAPITRE III : DISCUSSION
CONCLUSION
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
ANNEXES
