ACTIVITE ANTIDIARRHEIQUE DE L’EXTRAIT ML1712 CHEZ LE COBAYE

Etude de l’effet de l’extrait ML1712 sur la motilité intestinale

Dans le but d’étudier l’activité de l’extrait ML1712 sur la motilité intestinale, l’acétylcholine a été utilisée comme agent contracturant pour augmenter le péristaltisme intestinal (CARRE D et coll., 2001 ; HAMMAD et ABDALLAH S.S., 1997). Ce test a été effectué in vitro sur l’iléon isolé de cobaye. L’animal a été sacrifié par un coup sec à la nuque et exsanguiné en sectionnant des deux carotides. Puis après une laparotomie médiane, l’iléon a été prélevé. Cet organe a été immédiatement placé dans une boite de pétri contenant une solution de Tyrode maintenue à la température de 37°C et aérée à l’aide d’un aérateur électrique (KAGBO H .D. et EYARU S. G., 2012 ; UKWUANI A. N. et coll., 2012). Le contenu intestinal a été vidé, puis les mésentères ont été enlevés. Une portion de 2cm a été montée dans une cuve à organe isolé contenant 20 ml de solution de Tyrode maintenue à la température de 37°C et aérée avec de l’air. Pour fixer l’organe dans la cuve, un nœud a été placé à chaque extrémité de l’intestin isolé, une des deux extrémités a été fixée au fond de la cuve et l’autre a été reliée au stylet enregistreur avec un contre poids de 1g (EMENDORFER, 2OO5). La préparation a été laissée se stabiliser pendant 45 minutes en la rinçant toutes les 15 minutes. Puis l’organe a été sensibilisé avec de l’acétylcholine à la concentration de 10-6M dans le bain (PRASHANT B. et coll., 2013). Ensuite la préparation a été rincée trois fois pendant une autre période d’équilibration de 45 minutes. Puis l’acétylcholine a été injectée dans le bain d’une manière cumulative à l’aide d’un micro seringue pour obtenir des concentrations finales croissantes allant de 10-11 M dans le bain jusqu’à l’obtention d’un plateau de contraction considéré comme l’effet maximal de l’acétylcholine. Les contractions de l’organe ont été enregistrées sur un papier millimétré enroulé sur le tambour d’un kymographe qui a tourné à la vitesse de 5mm/s. Au plateau de contraction, l’extrait ML1712 a été injecté dans le bain d’une manière cumulative afin d’obtenir des concentrations croissantes dans le bain jusqu’au relâchement total de l’organe contracté par l’acétylcholine.

Etude du mécanisme d’action de l’extrait ML1712

Afin d’étudier le mécanisme d’action de l’extrait sur la motilité intestinale, son effet vis-à-vis de l’acétylcholine a été étudié. L’organe a été pré incubé dans un bain contenant de l’extrait ML1712 avant de le contracter avec l’acétylcholine (SABLASSOU K. et coll., 1998). Trois concentrations ont été utilisées : 0,125, 0,25 et 0,50 mg/ml. Après préincubation de 15minutes dans le bain contenant l’extrait à la concentration de 0,125 mg/ml, l’organe a été contracté avec de l’acétylcholine d’une manière cumulative jusqu’à l’obtention de la contraction maximale. Au plateau de contraction la préparation a été rincée et laissée se stabiliser pendant 45 minutes. Les mêmes manipulations ont été réalisées avec les deux autres concentrations. L’amplitude de la contraction a été mesurée et rapportée sur une échelle semi logarithmique en fonction de la concentration de l’acétylcholine pour déterminer l’effet maximal ainsi que les CE50 de l’acétylcholine en absence et en présence de l’extrait ML1712

Activité de l’extrait ML1712 sur la diarrhée sécrétoire

L’administration du sulfate de magnésium par voie orale chez les cobayes augmente le volume du fluide intestinal. Le volume du liquide observé chez le lot témoin est égal à 3,96 ± 0,15 ml. L’extrait ML1712 administré par voie orale diminue ce volume du liquide intestinal par rapport au témoin. A la dose de 300 mg /kg, le volume intestinal est de 3,33 ± 0,25 ml. En augmentant la dose de l’extrait ML1712 à 600mg /kg ce volume est égal à 2,8 ± 0,34 ml (P<0,05) (Figure 1).

Activité de l’extrait ML1712 sur la motilité intestinale

L’injection de l’Acétylcholine d’une manière cumulative dans le bain contracte l’iléon isolé du cobaye, et l’amplitude de la contraction augmente en fonction de la concentration de l’Acétylcholine dans le bain. La contraction maximale (100%) est obtenue avec la concentration de 10-6 M dans le bain. L’administration de l’extrait ML1712 de manière cumulative dans le bain à des concentrations allant de 0,1mg/ml à 3,2 mg/ml relâche cet iléon isolé contracté par l’acétylcholine. Ce relâchement est égale à 100% à la concentration de 3, 2mg/ml dans le bain. La détermination graphique de la CE50 de l’extrait, donne une valeur de 1, 2 mg/ml (Figure 2).

Mécanisme d’action de l’extrait ML1712

L’injection de l’acétylcholine dans le bain de façon cumulative permet de réaliser des concentrations croissantes dans le bain. L’augmentation de la concentration de l’acétylcholine dans le bain augmente l’amplitude de la contraction de l’iléon isolé. L’amplitude maximale est obtenue avec la concentration de 10-6M de l’acétylcholine, cette contraction est considérée comme l’effet maximal de l’acétylcholine (100%) avec une CE50 est égale à 3×10-9 M. En pré incubant l’iléon dans le bain avec l’extrait ML1712 aux concentrations respectives de 0, 125, 0,25 et de 0,5 mg/ml, l’effet maximal de l’acétylcholine passe de 100% à 78,12 ± 4,46 %, 65,79 ± 3, 23 % et 48,25 ± 1,60 % (P< 0,05). Sa CE50 passe respectivement de 3×10-9 , 4,2×10-9 , 2,1×10-8 à 5×10-8 M (P< 0,05)

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Table des matières

I. INTRODUCTION
II. MATERIELS ET METHODES
A. PARTIE CHIMIQUE
1. Préparation de l’extrait ML1712
2. Criblage phytochimique de l’extrait ML1712
B. PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1. Animaux d’expérimentation
2. Préparation de la solution de Tyrode
3. Etude de l’activité de l’extrait ML1712 sur la diarrhée sécrétoire
4. Etude de l’activité de l’extrait ML1712 sur la motilité intestinale
5. Etude du mécanisme d’action de l’extrait ML1712
C. EXPRESSION ET ANALYSES DES RESULTATS
III. RESULTATS
A. PARTIE CHIMIQUE
1. Rendement de l’extraction et propriété de l’extrait ML1712
2. Résultats du criblage phytochimique
B. PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1. Activité de l’extrait ML1712 sur la diarrhée sécrétoire
2. Activité de l’extrait sur la motilité intestinale
3. Mécanisme d’action de l’extrait ML1712
IV. DISCUSSION
V. CONCLUSION
BIBLIOGRAPHIE
WEBOGRAPHIE