ACTIVITÉ ANTIDIABÉTIQUE DE L’EXTRAIT BRUT DE LA PLANTE CODÉE RAZU01 (VERBENACÉES)

Préparation de l’extrait brut

                 La partie aérienne de la plante RAZU01 récoltée a été découpée en petits morceaux pour accélérer le séchage qui a été fait à l’ombre, à la température ambiante du laboratoire durant une période de deux mois. Elle est ensuite broyée en poudre fine à l’aide d’un broyeur électrique de laboratoire. Puis, 200 g de poudres ont été macérés dans 2 L d’éthanol (EtOH) 90° pendant 12h, à la température ambiante du laboratoire. Cette opération a été répétée trois fois pour pouvoir extraire le maximum de molécules actives contenues dans la matière végétale. Notons que chaque macération a été suivie d’une filtration sous vide au Büchner sur papier joseph afin d’exclure les résidus du filtrat. Les filtrats obtenus ont étés regroupés puis évaporés sous vide à l’aide d’un Évaporateur rotatif (BÜCHI type R-114, Switzeland) à 40°C afin d’éliminer le solvant de macération et obtenir ainsi une substance très concentrée qui est l’extrait brut (EB) de la plante RAZU01.

Étude de l’effet d’EB sur la glycémie des rats rendus diabétiques

a) Établissement des modèles diabétiques : Des rats adultes mâles de race WISTAR ont été rendus diabétiques par injection sous-cutanée de monohydrate d’Alloxane (ALX, SIGMA) à la dose de 120 mg/kg du poids corporel en solution dans du sérum physiologique (MBODJ N.A., 2003). Quarante-huit heures après l’administration d’ALX, les taux de glycémie non-à-jeun (NFBG) des rats ont été mesurés comme précédemment (Chapitre 3c). Les rats ayant eu un taux de NFBG supérieur à 300 mg/dl ont été considérés comme diabétiques et ont été retenus pour l’expérimentation tandis que les rats avec un taux de NFBG inférieur à 300 mg/dl ont été exclus de l’étude pharmacologique (ISLAM M.S., 2011). Les animaux sélectionnés ont été répartis en plusieurs lots de 4 rats dans des cages transparentes en polymère de carbone, à température ambiante et avec un cycle lumièreobscurité naturel. Et ils ont eu accès libre à l’eau potable et à la provende granulée LFL 1420 pour rat durant toute la période expérimentale.
b) Groupage des animaux diabétiques : Cinq lots des rats rendus diabétiques ont été utilisés pour l’évaluation de l’effet de l’EB de RAZU01 sur l’hyperglycémie permanente dont la répartition est la suivante :
Lot1 : groupe de contrôle traité avec de l’ED (10 ml/kg PC per os)
Lot2 : groupe traité avec l’extrait brut de RAZU01 (150 mg/kg PC per os)
Lot3 : groupe traité avec l’extrait brut de RAZU01 (300 mg/kg PC per os)
Lot4 : groupe traité avec l’extrait brut de RAZU01 (600 mg/kg PC per os)
Lot5 : groupe de référence traité avec l’Actrapid® (1 UI/kg PC sc)
c) Traitement et mesure de la glycémie : Le traitement a été effectué pendant 7 jours successifs (MBODJ N.A., 2003). Les mesures des taux de glycémie ont été faites aux J0 (Premier jour du traitement), J2 (Troisième jour du traitement), J4 (Cinquième jour du traitement) et J6 (Septième jour du traitement). Chaque mesure a été effectuée 1h après l’administration des extraits.

Étude de la toxicité aiguë de l’extrait brut de RAZU01

                   Ce test a été effectué dans le but de déterminer les doses létales en fonction de la dose et de détecter les éventuels effets toxiques de l’extrait brut de RAZU01 chez la souris. Après une période de jeûne de 24 h avec accès libre à l’eau, 20 souris de souche SWISS ont été utilisées et répartis en 4 groupes de 5 souris : un groupe témoin qui n’a reçu que de l’eau distillée (ED) et 3 autres groupes auxquels de l’extrait brut de la plante RAZU01 a été administré aux doses respectives de 500, 1000 et 2000 mg/kg dans un volume de 1ml/100g du poids corporel de l’animal. Les signes de toxicité ainsi que le taux de mortalité ont été observés pendant les 6 premières heures après l’administration de l’extrait brut et puis toutes les 24 heures pendant trois jours (MALONE M.R. et ROBICHAUD R.V., 1962).

Effet de l’EB sur l’hyperglycémie temporaire chez la souris

                       Les résultats obtenus sur l’hyperglycémie provoquée chez les souris traitées avec l’extrait brut de RAZU01 à 200 mg/kg ou avec le Glibenclamide sont présentés sur la Figure 2. À T30 c’est-à-dire 30 min après l’HGPO et 90 min après l’administration de l’extrait brut, ce dernier provoque une réduction significative de la glycémie des souris traitées par rapport à celle des animaux du lot témoin (p˂0,001). En effet, la glycémie des animaux traités avec EB n’est plus que 12,02 ± 4% du pic maximal considéré comme une augmentation 100% alors que celle des animaux témoins reste encore à 63,88 ± 4,59% de ce pic. La figure 3 illustre la cinétique de l’activité hypoglycémiante de l’extrait brut de RAZU01 sur l’hyperglycémie temporaire provoquée par administration orale de solution glucosée chez la souris de souche OF-1. Une heure après son administration, l’extrait brut ne provoque qu’une baisse de 3,2 ± 3% de la glycémie de base des animaux. Elle n’est pas statistiquement significative. À T15 (15 min après l’HGPO), la baisse de la glycémie induite par l’EB de RAZU01 est de 0,3 ± 0,2% (Non Significative). Son effet hypoglycémiant maximal est obtenu à T30 avec une réduction de 47,5 ± 4,74% par rapport au témoin (p˂0,001). La baisse est devenue non significative à T60 et à T120 avec une baisse respectivement de 14,5 ± 5% et de 8,2 ± 4%.

Effet de l’EB sur la triglycéridémie des rats rendus diabétiques

                     La figure 6 représente les résultats du dosage des triglycérides plasmatiques des rats rendus diabétiques traités et non traités. Les résultats montrent que :
– L’induction du diabète à l’Alloxane augmente significativement le taux plasmatique de triglycérides (p=0,015). Soit une valeur de 1,16 ± 0,17 g/l contre 0,65 ± 0,79 g/l des rats témoins normaux.
– La baisse de la triglycéridémie observée chez le lot traité avec l’EB de RAZU01 à 150 mg/kg n’est pas statistiquement significative par rapport à celle du lot témoin diabétique (p=0,476). Soit une valeur de 0,95 ± 0,11 g/l contre 1,16 ± 0,11 g/l des rats témoins diabétiques.
– Par contre, le traitement avec l’Extrait Brut de RAZU01 à 600 mg/kg réduit significativement l’hypertriglycéridémie des rats rendus diabétiques par rapport au lot témoin diabétique (p=0,013) et le taux plasmatique de triglycéride des rats  0,17 g/l des rats témoins diabétiques et 0,65 ± 0,79 g/l des rats témoins normaux.

CONCLUSION

                       Les différentes approches menées au cours de ce travail de recherche nous ont permis de révéler les profils chimiques, pharmacologiques et toxicologiques de l’extrait brut de la plante codée RAZU01. La plante est riche en composés phénoliques qui pourraient être responsables de son activité antidiabétique. L’ensemble des résultats pharmacologiques justifient la vertu antidiabétique de la plante RAZU01 et son utilisation thérapeutique dans la médecine traditionnelle betsimisaraka. Les mécanismes probables de cette action antidiabétique pourraient être l’activation de la glycogénogenèse hépatique et la stimulation de l’utilisation périphérique de glucose. La suite des travaux consistera à identifier et à isoler la ou les molécule(s) responsable(s) de l’activité antidiabétique de la plante RAZU01 ainsi que l’élucidation de son mécanisme d’action et le développement en tant que médicament d’origine végétale.

Table des matières

LISTE DES TABLEAUX
LISTE DES FIGURES
SIGLES ET ABREVIATIONS
Partie I : INTRODUCTION
Partie II : MATERIELS ET METHODES
A. ETUDE PHYTOCHIMIQUE
1. Matériel végétal
2. Préparation de l’extrait brut
3. Screening phytochimique
B. ETUDE PHARMACOLOGIQUE
1. Animaux d’expérimentation
2. Préparation des extraits pour les tests
3. Étude de l’effet de l’EB de RAZU01 sur l’hyperglycémie temporaire chez la souris
a) Groupage des animaux
b) Induction de l’hyperglycémie temporaire
c) Traitement et mesure de la glycémie
4. Étude de l’effet d’EB sur la glycémie des rats rendus diabétiques
a) Établissement des modèles diabétiques
b) Groupage des animaux diabétiques
c) Traitement et mesure de la glycémie
5. Étude de l’effet de l’EB de RAZU01 sur le taux des triglycérides plasmatiques des rats rendus diabétiques
a) But du test
b) Méthode
c) Préparation des échantillons à doser
6. Paramètres mesurés
7. Test de TOXICITE AIGÜE
8. Analyse statistique des résultats
Partie III : RESULTATS
A. ETUDE PHYTOCHIMIQUE
1. Rendement de l’extraction
2. Résultat du criblage phytochimique
B. ETUDE PHARMACOLOGIQUE
1. Effet de l’EB sur l’hyperglycémie temporaire chez la souris
2. Résultat de l’induction du diabète chez le rat
3. Effet de l’EB de RAZU01 sur le diabète expérimental
4. Effet de l’EB sur la triglycéridémie des rats rendus diabétiques
5. Résultat du test de TOXICITE AIGÜE
Partie IV : DISCUSSION
Partie V : CONCLUSION
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES

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